抗體偶聯(lián)藥物（ADC）是由靶向特異性抗原的單克隆抗體與小分子細(xì)胞毒性藥物通過連接子鏈接而成，兼具傳統(tǒng)小分子化療的強(qiáng)大殺傷效應(yīng)及抗體藥物的腫瘤靶向性。ADC由三個(gè)主要部分組成：負(fù)責(zé)選擇性識(shí)別癌細(xì)胞表面抗原的抗體，負(fù)責(zé)殺死癌細(xì)胞的藥物有效載荷，以及連接抗體和有效載荷的連接子。理想狀態(tài)下，ADC藥物進(jìn)入體內(nèi)后，抗體部分與表達(dá)腫瘤抗原的靶細(xì)胞特異性結(jié)合，ADC藥物被腫瘤細(xì)胞內(nèi)吞后，進(jìn)入溶酶體進(jìn)行降解，小分子細(xì)胞毒藥物在胞內(nèi)以高效活性形式被足量釋放，從而完成對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷。
ADC在血漿中的穩(wěn)定性對(duì)于各種物種來說是至關(guān)重要的，并且需要盡早考察，因?yàn)橛行лd荷釋放應(yīng)該發(fā)生在目標(biāo)位點(diǎn)，而循環(huán)中的不穩(wěn)定可能會(huì)導(dǎo)致全身有效負(fù)載暴露增加造成有害的脫靶效應(yīng)。因此評(píng)估ADC有效載荷釋放和釋放機(jī)制以及識(shí)別有效載荷代謝物非常重要。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)最關(guān)鍵的是選擇最佳的代謝系統(tǒng)。
ADC藥物的體外payload釋放實(shí)驗(yàn)在肝S9組分、溶酶體環(huán)境或者靶細(xì)胞的孵育體系中完成。溶酶體能模擬靶細(xì)胞內(nèi)的ADC代謝過程，可用于研究ADC的有效載荷釋放。但是，它們?nèi)狈Φ湫偷乃幬锎x酶（例如CYP和UGT），因此不能用于鑒定由釋放的有效載荷形成的進(jìn)一步代謝物。相反，肝臟S9組分含有所有主要代謝酶，并且它們的使用不依賴于肝細(xì)胞中的主動(dòng)或被動(dòng)運(yùn)輸。因此，通過適當(dāng)選擇pH值，S9組分可用于研究有效載荷釋放和代謝。酸化的肝臟S9組分模擬溶酶體的酸性環(huán)境，進(jìn)行ADC降解試驗(yàn)是合適的。
Pfize的工作人員在體外實(shí)驗(yàn)中[1]，將cleavable linker的ADC和non-cleavablelinker的ADC在溶酶體環(huán)境或者肝S9組分中孵育，模擬體內(nèi)的代謝情況，將代謝產(chǎn)物用orbitrap高分辨質(zhì)譜以DDA模式進(jìn)行采集以鑒定代謝產(chǎn)物。Andrew等使用三重四級(jí)桿質(zhì)譜以中性丟失掃描和前體離子掃描的方式也實(shí)現(xiàn)了對(duì)溶酶體降解的ADC藥物進(jìn)行代謝產(chǎn)物鑒定[2]。
