01研究背景
食管癌是一種高度惡性腫瘤，食管鱗狀細胞癌（ESCC）是食管癌常見的組織學亞型，預后差，全球患病率高。RNA N6 -甲基腺苷（m6A）修飾與癌癥進展有關，但其在癌癥進展過程中調節長鏈非編碼RNA的作用尚不清楚。在本研究中作者發現m6A去甲基化酶（FTO）穩定LINK-A，以促進ESCC的細胞增殖和化療耐藥，并確定FTO/LINK-A/MCM3/HIF-1α軸是ESCC的一個有希望的治療靶點。
02部分結果展示
1. LINK-A在ESCC中發揮致癌作用
作者發現FTO與ESCC的化學耐藥相關，并能穩定LINK-A。為了研究LINK-A在ESCC中的作用，作者利用原位雜交分析ESCC患者中LINK-A的表達，發現LINK-A在癌組織中的表達明顯高于正常組織并與預后不良密切相關。體外和體內功能喪失和獲得實驗發現沉默LINK-A可顯著抑制化療耐藥和親本ESCC細胞系的細胞增殖，而過表達LINK-A則可促進細胞增殖；異種移植實驗表明，在KYSE450/DDP和KYSE450細胞中沉默LINK-A可顯著延緩腫瘤生長并引起化療敏感性，而在KYSE150細胞中過表達LINK-A可顯著促進腫瘤生長并對化療產生耐藥性。這些結果表明LINK-A在ESCC中發揮致癌作用。
圖1. LINK-A在ESCC中發揮致癌作用
2. LINK-A通過促進MCM3與CDK1的相互作用促進MCM3磷酸化
為了探究LINK-A的致癌機制，作者進行了質譜、RNA下拉、RIP-qPCR等實驗，發現MCM3與LINK-A存在特異性相互作用，WB分析表明，LINK-A顯著促進了MCM3在Ser112位點的磷酸化。有研究表明，CDK1磷酸化MCM3的Ser112位點，并介導MCM2-7復合物的組裝和染色質裝載。RNA下拉和WB的結果證實了LINK-A和CDK1之間的相互作用, coIP實驗發現過表達LINK-A促進CDK1和MCM3之間的相互作用。這些結果表明LINK-A通過促進MCM3與CDK1的相互作用促進MCM3磷酸化。進一步研究發現MCM3磷酸化促進MCM2-7復合物的組裝和染色質裝載以及細胞周期進程和細胞增殖。此外，LINK-A消除MCM3介導的HIF-1α轉錄抑制來激活HIF-1α，從而促進了腫瘤代謝重編程和化療耐藥。
圖2. LINK-A通過促進MCM3與CDK1的相互作用促進MCM3磷酸化
3. 靶向LINK-A使ESCC對細胞毒性化療敏感
為了確定靶向LINK-A是否是ESCC的有希望的治療策略，作者建立了異種移植小鼠模型，發現AAV介導的LINK-A沉默顯著增加了ESCC異種移植的DDP敏感性。同時與化療敏感組相比，化療耐藥組中LINK-A的表達水平顯著上調，且樣本中LINK-A的表達與FTO的表達呈正相關，這進一步證實了FTO在ESCC化療耐藥過程中對LINK-A的調控作用。這些結果表明LINK-A是ESCC化療耐藥的罪魁禍首，并揭示了LINK-A介導的化療耐藥的潛在機制以及LINK-A在ESCC中的穩定性調控。
圖3. 靶向LINK-A使ESCC對細胞毒性化療敏感
03實驗結論
本研究闡明了LINK-A致癌的機制，LINK-A促進 MCM3的磷酸化，導致MCM復合物裝載到染色質上，從而促進細胞周期進程和隨后的細胞增殖；此外，LINK-A破壞MCM3與HIF-1α之間的相互作用，消除MCM3介導的HIF-1α轉錄抑制，促進腫瘤代謝重編程和化療耐藥。本研究表明了FTO/LINK-A/MCM3/HIF-1α軸是ESCC的一個有希望的治療靶點。