在體外培養(yǎng)細胞實驗中，對于難養(yǎng)的細胞或者數(shù)量較少的細胞，常常需要預先在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板底部加入一些活的原代細胞或者靜息的腫瘤細胞以輔助目的細胞的生長，這就是飼養(yǎng)層細胞。至于飼養(yǎng)層細胞可以促進其它細胞生長的原理目前有兩種解釋：一種解釋是飼養(yǎng)層細胞可以減小培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板對細胞的毒害作用；另一種解釋是飼養(yǎng)層細胞可以釋放出一些必要的生長因子，可以促進目的細胞的生長。在單抗制備過程中，剛剛融合的細胞和克隆化的細胞都比較難以生長，因此都需要添加飼養(yǎng)層才能較快地生長。因此在雜交瘤細胞篩選、克隆化和擴大培養(yǎng)過程中，加進飼養(yǎng)細胞是十分必要的。
飼養(yǎng)層細胞的來源主要有兩種，一種是動物體內天然的細胞，另一種是商品化配制的飼養(yǎng)層替代品。單抗制備中可以使用的天然飼養(yǎng)層細胞主要有：腹腔巨噬細胞、脾臟細胞、胸腺細胞、放射線照射的成纖維細胞系等。雖然這些天然飼養(yǎng)層細胞中含有生長因子和激素等活性物質，可以促進骨髓瘤細胞生長繁殖，但是天然飼養(yǎng)層細胞的標準化制備一直存在諸多問題，不同的操作人員、操作方法、細胞來源都可能會引起不同批次的飼養(yǎng)層細胞之間的較大差異。飼養(yǎng)細胞的量為一般為2×10^4或10^5細胞/孔。一般在融合時選取腹腔巨噬細胞作為飼養(yǎng)層細胞，而在克隆化的過程中選擇脾臟細胞做飼養(yǎng)細胞。主要是因為其制備方便且數(shù)量多，一般一只鼠的脾臟細胞可以鋪10塊96孔板，從而滿足了克隆化時需要細胞數(shù)目多這一要求。
- 常規(guī)飼養(yǎng)層細胞的獲取
腹腔巨噬細胞來源方便并且制備簡單，且巨噬細胞具有清除死亡細胞和吞噬細胞碎片的能力，因此一般融合時會選擇腹腔巨噬細胞作為飼養(yǎng)層細胞。
（1）取7～8周齡Balb/c雌鼠脫頸椎處死，于75%酒精浸泡消毒3~5min；
（2）在超凈工作臺內用無菌手術剪將小鼠腹腔剪開一個小口，用無菌膠頭滴管將預冷的不完全培養(yǎng)基注入腹腔內，沿腹腔壁多次吹洗，充分懸起腹腔內細胞后轉移至無菌離心管，重復2~3次；
（3）1000rpm，離心5min，棄上清重懸細胞，1000rpm，離心5min，重復洗滌細胞三次；
（4）加入完全培養(yǎng)基重懸細胞，稀釋至所需用量體積，100μl/well加入96孔板；37℃，5%CO2飽和濕度細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)，備用。
克隆化時普遍選用脾細胞制備飼養(yǎng)層細胞。
（1）小鼠脫頸椎處死，于75%酒精浸泡消毒5min；
（2）無菌鑷子摘取脾臟，剔除結締組織后，于0.4目篩網中研磨，加適量不完全培養(yǎng)基制成細胞懸液，1000rpm，離心5min，重復洗滌細胞三次 ；
（3）取適量完全培養(yǎng)基充分懸起細胞后加入96孔板，100μl/well，37℃，5%CO2飽和濕度細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
1、工作濃度
（1） 融合和亞克隆階段：10% (v/v) 加入到完全培養(yǎng)基中；
（2）細胞擴大培養(yǎng)和復蘇階段：2.5%-5% (v/v) 加入到完全培養(yǎng)基中。
注意：Hybridoma Feeder 添加因子適用的基礎培養(yǎng)基為RPMI 1640、IMDM和DMEM，其它培養(yǎng)基未經測試。Hybridoma Feeder 添加因子不可代替血清使用，只作為細胞培養(yǎng)添加劑使用。
2、產品特性
外 觀：紅色透明溶液
來 源：Hybridoma Feeder 添加因子是源于小鼠T細胞系的適應性培養(yǎng)基，含多種細胞生長因子，例如，集落刺激因子，IL2，IL6
添加成份：胎牛血清（約10%）；胰島素；鏈霉素；青霉素；酚紅
過濾條件：經 0.2μm 濾膜多重過濾，并通過質控檢測
微生物檢測：支原體檢測陰性
穩(wěn) 定 性：2-8℃避光可保存3周，- 20℃可保存24個月，建議分裝后凍存，避免反復凍融
3、相比飼養(yǎng)細胞，Hybridoma Feeder 添加因子具有如下特點：
（1） 可以提高雜交瘤細胞的生長速度。
（2）用于新融合細胞，可使克隆集落增多、增大。
（3） 雜交瘤亞克隆時，可以提高亞克隆效率。
（4）完全代替飼養(yǎng)細胞，避免污染，減少工作步驟。
（5）便于客戶建立標準化操作步驟（SOP） ，提高細胞培養(yǎng)和實驗結果的重復性
同時為滿足不同客戶要求，Biodragon又推出了無蛋白的雜交瘤生長因子-Hybridoma PF（Protein Free），Hybridoma PF是一種具有獨特純化學配方的雜交瘤細胞添加試劑，能提供雜交瘤細胞生長的必要因子，讓細胞充滿活力，進而大幅提升細胞存活率，并且不影響抗體分泌效果。相比飼養(yǎng)細胞，Hybridoma PF具有如下特點：
（1）純化學配方，無生物性成份，不含L-谷氨酰胺，不影響抗體分泌效果；
（2）可以提高雜交瘤細胞的生長速度；
（3）用于新融合細胞，可使克隆集落增多、增大，有效增加細胞融合成功率；
（4）雜交瘤亞克隆時，可以提高亞克隆效率；
（5）完全代替飼養(yǎng)細胞，避免污染，減少工作步驟；
（6）便于SOP的建立。
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- 公司簡介
博奧龍Biodragon是一家由留學歸國人員創(chuàng)辦的生命科學領域技術研發(fā)企業(yè)，專業(yè)從事新型生化試劑的研發(fā)和銷售。公司理念是通過自主創(chuàng)新的品牌產品改變傳統(tǒng)實驗模式，使生命科學研究變得更輕松、更高效。公司成立八年多來推出了上萬種自主品牌產品，其中包括QuickAntibody?免疫佐劑、QuickShuttle?轉染試劑、QuickFreezing?細胞凍存液、QuickVerification?膠體金檢測卡、Hybridoma Feeder添加因子和Pan-HPV? HPV L1抗體等多種獨特的自主知識產權產品。秉承“專業(yè)、創(chuàng)新”的理念，公司將繼續(xù)在擅長專業(yè)領域做強做大，為客戶提供更多的創(chuàng)新產品和服務，力爭成為國際知名的品牌生化試劑公司。
公司主要產品有抗體制備全套產品、病毒包裝相關產品、2萬多種科研用抗原抗體、近300種病理級抗體、近3000余種病毒蛋白及病毒抗體，另有WB、IHC、ELISA、細胞培養(yǎng)相關試劑及諸多特色產品和特色技術服務。
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