辣根中含有一種過氧化物酶，分子小，穩(wěn)定好，活性高。在生物及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有大本領(lǐng)，下面我們來一探它的真面目吧。
HRP簡介
HRP中含有血紅素，能利用H2O2氧化許多有機及無機化合物，被發(fā)現(xiàn)廣泛分布于植物界，其中辣根（辣根是一種常年生香草，在世界大部分溫和地區(qū)都有種植）中含量非常高，故名辣根過氧化物酶（Horseradish Peroxidase,HRP）。HRP是由無色的酶蛋白和棕色的鐵卟啉結(jié)合而成的糖蛋白，糖含量18%。活性高，穩(wěn)定，分子量小，純酶容易制備，所以常用于生物及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。
HRP由多個同工酶組成，分子量為40,000，等電點為PH3～9，酶催化的最適PH因供氫體不同而稍有差異，但多在PH5左右。酶溶于水和58%以下飽和度硫酸銨溶液。HRP的輔基和酶蛋白最大吸收光譜分別為403nm和275nm，一般以O(shè)D403nm /OD275nm的比值RZ（德文Reinheit Zahl）表示酶的純度。高純度的酶RZ值應(yīng)在3.0左右（最高可達3.4）。RZ值越小，非酶蛋白就越多。
根據(jù)RZ值，有以下這些用途：
1） RZ>3 活性 >250u/mg， 主要應(yīng)用于免疫學(xué)，是高純度的過氧化酶。采用特殊色譜純化技術(shù)以除去會影響免疫學(xué)反應(yīng)的同工酶B .
2） RZ>2 活性 >180u/mg ，主要應(yīng)用于臨床化學(xué)，我們的客戶也有將這個規(guī)格的產(chǎn)品應(yīng)用于免疫學(xué)研究的。此時，一個標(biāo)準(zhǔn)化的分析方法就變得尤為重要。
3） RZ>1 活性 >100u/mg，主要應(yīng)用于血糖試紙和尿液分析試紙。
4） RZ>0.6 活性 >60u/mg ，主要應(yīng)用于尿液分析試紙。
免疫學(xué)中的應(yīng)用
HRP（辣根過氧化物酶）可催化ECL等化學(xué)發(fā)光試劑產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)發(fā)光，或催化DAB，TMB等底物顯色。HRP標(biāo)記可以直接用于免疫學(xué)實驗，省卻中間二抗步驟；在雙加心ELISA中也應(yīng)用最為廣泛。
發(fā)光原理
（1）發(fā)光過程：在化學(xué)發(fā)光酶免疫分析（CLEIA）中，使用過氧化物酶標(biāo)記抗體，進行免疫反應(yīng)后，利用魯米諾作為發(fā)光底物，在過氧化物酶和起動發(fā)光試劑（NaOH和H2O2 ）作用下魯米諾發(fā)光，酶免疫反應(yīng)物中酶的濃度決定了化學(xué)發(fā)光的強度。
（2）常用底物：魯米諾(32氨基鄰苯二甲酰肼,luminol),或其衍生物如異魯米諾(42氨基鄰苯二甲酰肼),是一類重要的發(fā)光試劑。
（3）發(fā)光條件：魯米諾的氧化反應(yīng)在堿性緩沖液中進行, 在過氧化物酶及活性氧[過氧化陰離子,單線態(tài)氧,羥自由基,過氧化氫]存在下,生成激發(fā)態(tài)中間體, 當(dāng)其回到基態(tài)時發(fā)光,其波長為425nm。
（4）研究發(fā)展：傳統(tǒng)的化學(xué)發(fā)光體系（HRP- H2O2 -LUMINOL）為幾秒內(nèi)瞬時閃光，存在發(fā)光強度低、不易測量等缺點。 后來，在發(fā)光系統(tǒng)中加入增強發(fā)光劑，以增強發(fā)光信號，并在較長的時間內(nèi)保持穩(wěn)定，便于重復(fù)測量，從而提高分析靈敏度和準(zhǔn)確性。
產(chǎn)品推薦
博奧龍的HRP標(biāo)記試劑盒采用改良的碘氧化法活化辣根過氧化物酶（HRP），經(jīng)過氧化以后活化的HRP可以與待標(biāo)記物的游離氨基結(jié)合，發(fā)生希夫堿反應(yīng)（Schiff's Base Reaction）。本品適用于帶有游離氨基的物質(zhì)的標(biāo)記，比如：帶有游離氨基（伯胺）的小分子化合物，蛋白或抗體。
有效期12個月（HRP有效期12個月）
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