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在科研和細(xì)胞工程等領(lǐng)域中構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株，經(jīng)常需要實(shí)現(xiàn)多個基因的穩(wěn)定共表達(dá)，目前常用的策略是多重感染、多重分離篩選等，然而這種方式存在很多弊端：①真核細(xì)胞中可使用的篩選標(biāo)記數(shù)量有限；②實(shí)驗(yàn)周期長；③同時(shí)使用多個不同的篩選基因可能對細(xì)胞產(chǎn)生不利影響；④多基因串聯(lián)，病毒包裝效率低等；以上問題為篩選多基因共表達(dá)的穩(wěn)轉(zhuǎn)株在時(shí)間和成本等方面提出了挑戰(zhàn)。因此，有必要開發(fā)新的技術(shù)手段解決以上問題。
維真生物建立了一種可簡單快速地實(shí)現(xiàn)多基因共表達(dá)的分裂篩選系統(tǒng)！
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目前，我們已經(jīng)利用上述系統(tǒng)，成功獲得了共表達(dá)四種轉(zhuǎn)錄因子（Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4）的IPS穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。 如上圖所示，我們將四種轉(zhuǎn)錄因子構(gòu)建到兩個慢病毒載體中并包裝成慢病毒。隨后將兩個質(zhì)粒與慢病毒分別轉(zhuǎn)導(dǎo)或者共轉(zhuǎn)293A細(xì)胞，Puro篩選后，我們發(fā)現(xiàn)沒有“攝取”到載體和只“攝取”到一種載體的細(xì)胞大量死亡，而“攝取”到雙載體的細(xì)胞存活率較高。并且，雙載體“攝取”組細(xì)胞四種轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)水平均有顯著增加。這說明，大量的雙慢病毒載體成功進(jìn)入同一細(xì)胞，表達(dá)了完整的抗生素蛋白，且四種轉(zhuǎn)錄因子均實(shí)現(xiàn)了過表達(dá)。 （點(diǎn)擊可看大圖） 圖2. 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后結(jié)果 圖3. 慢病毒感染后結(jié)果 結(jié)語：
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