考馬斯亮藍(lán)染色
1921年, Folin首創(chuàng)了測(cè)定可溶性蛋白質(zhì)含量的方法Folin-酚試劑法。Folin-酚試劑法是基于蛋白質(zhì)分子中酪氨酸和色氨酸殘基 (酚基) 與酚試劑 (磷鎢酸#磷鉬酸) 可發(fā)生藍(lán)色反應(yīng)的原理；而藍(lán)色化合物的顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度呈正比。1951年, Lowry對(duì)Folin法進(jìn)行了改進(jìn), 他發(fā)現(xiàn)在堿性溶液中, 蛋白質(zhì)分子中的肽鍵可與堿性銅試劑中的Cu2+螯合, 形成蛋白質(zhì)-銅復(fù)合物, 該復(fù)合物能夠與Folin酚試劑反應(yīng)產(chǎn)生藍(lán)色化合物，這一改進(jìn)大大提高了測(cè)定的靈敏度, 改進(jìn)后的方法被稱為“Lowry法”。不過(guò)Lowry法仍存在測(cè)定范圍窄、使用試劑多、干擾物質(zhì)多、耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)、反應(yīng)時(shí)間難以控制等缺點(diǎn)。1976年美國(guó)科學(xué)家Bradford用考馬斯亮藍(lán)G250與蛋白質(zhì)結(jié)合的方法來(lái)定量測(cè)定蛋白質(zhì)含量。考馬斯亮藍(lán)法是目前實(shí)驗(yàn)室中最常見、靈敏度最高的一種測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法。它將比色法和染料結(jié)合法相結(jié)合, 與其他傳統(tǒng)方法相比具有許多突出的優(yōu)點(diǎn), 被廣泛應(yīng)用于各類生物材料的可溶性蛋白含量測(cè)定, 是生物化學(xué)、植物生理學(xué)、分子生物學(xué)、食品科學(xué)等實(shí)驗(yàn)課程中的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目之一。
考馬斯亮藍(lán)是一種陰離子染料， 常用考馬斯亮藍(lán)G250和R250。考馬斯亮藍(lán) G250在游離狀態(tài)下呈紅色，當(dāng)它與蛋白質(zhì)通過(guò)疏水結(jié)合后變?yōu)樗{(lán)色，蛋白質(zhì)-色素結(jié)合物在595nm波長(zhǎng)下有最大光吸收。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比，因此可用于蛋白質(zhì)的定量測(cè)定。考馬斯亮藍(lán)G250染色可以同時(shí)固定和染色，因此能立即觀察顯色結(jié)果，可用來(lái)確定電泳時(shí)間，觀察初步結(jié)果。考馬斯亮藍(lán)R250染色靈敏度比G250高得多，但對(duì)酸溶蛋白、醇溶蛋白不合適，因?yàn)樵谌旧^(guò)程中，蛋白質(zhì)會(huì)溶解在染色液或脫色液中。可用于SDS-PAGE 或非變性PAGE蛋白電泳的快速染色，或Western轉(zhuǎn)膜后PAGE膠上殘余蛋白的檢測(cè)。
1、試劑配制
（1）考馬斯亮藍(lán)染色液R250配方（100ml）考馬斯亮藍(lán)R250 | 0.25g |
甲醇 | 45ml |
乙酸CH?COOH | 10ml |
ddH2O | 45ml |
（2）考馬斯亮藍(lán)脫色液配方（1000ml）
甲醇 | 250ml |
乙酸CH?COOH | 80ml |
ddH20定容至1000ml | |
2、具體操作步驟
（1）電泳結(jié)束后，切取含有Maker蛋白和蛋白樣品的凝膠塊放入適量考馬斯亮藍(lán)染色液中，保證液體可以完全浸沒(méi)凝膠；（2）置于水平搖床或側(cè)擺搖床上緩慢晃動(dòng)，室溫染色1h及以上（或置于微波爐等加熱裝備進(jìn)行間隔加熱染色，每次3~5min，加熱3~4次）；
（3）回收染色液（染色液可重復(fù)利用2~3次）；
（4）加入適量考馬斯亮藍(lán)脫色液，確保脫色液完全覆蓋凝膠；
（5）置于水平搖床或側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)，室溫脫色4~24h。期間更換脫色液2~4次，直至藍(lán)色背景基本脫去。通常蛋白條帶在脫色1~2小時(shí)后就可出現(xiàn)（也可以通過(guò)微波爐等加熱裝置間接加熱進(jìn)行脫色，每次3~5min，加熱次數(shù)根據(jù)脫色效果而定）
（6）完成脫色后，用ddH2O浸泡，進(jìn)行檢測(cè)和觀察。
QuickBlue快速染膠液
1、產(chǎn)品詳情
Biodragon的QuickBlue快速染膠液是綠色環(huán)保型凝膠染液，可對(duì)凝膠中的蛋白條帶進(jìn)行染色，可替代常規(guī)的考馬斯亮藍(lán)染液。與常規(guī)考馬斯亮藍(lán)染色相比：
（1）無(wú)需凝膠固定和脫色，省時(shí)，簡(jiǎn)單；
（2）不含有甲醇、乙酸等對(duì)身體有害，刺鼻的物質(zhì)；
（3）無(wú)需在通風(fēng)櫥中操作；
（4）可以完全代替常規(guī)的考馬斯亮藍(lán)染液。
2、使用方法
（1）取出電泳槽中的凝膠，放到染膠容器中；（2）加染液至覆蓋凝膠，在搖床上染色；
（3）將染出條帶的凝膠放水中保存即可。
注意：
（1）對(duì)于靈敏度要求不是極高的普通實(shí)驗(yàn)室的染膠實(shí)驗(yàn)，一般染色10-20分鐘（可以將100ng含量以上的蛋白染出條帶），低背景，無(wú)需脫色，直接觀察或者拍照；
（2）對(duì)于靈敏度要求極高的染膠實(shí)驗(yàn)，一般可采用染色1-2小時(shí)（可以將10ng含量蛋白染出條帶），低背景，無(wú)需脫色，直接觀察或者拍照；
（3）一般染色2小時(shí)后，蛋白條帶基本不會(huì)再加深，而背景會(huì)繼續(xù)加深，所以一般建議染色不要超過(guò)2小時(shí)；
（4）如果對(duì)凝膠背景要求很高，可將蛋白膠在水中，然后放在搖床上2小時(shí)，期間換4次水，可快速脫去背景顏色，也可以在水中浸泡過(guò)夜后，可使凝膠背景變成完全透明狀態(tài)。
3、產(chǎn)品特性
（1）外觀：藍(lán)色液體（2）成份：為G-250考馬斯亮藍(lán)顏料，含有少量乙醇，磷酸
（3）保存：室溫避光保存
（4）穩(wěn)定性：室溫可保存24個(gè)月
4、參考數(shù)據(jù)
圖1~5為不同濃度BSA凝膠電泳的QuickBlue快速染膠液染色效果圖圖1 ：染色20min 效果圖
圖2 ：染色1h效果圖
圖3：染色2h效果圖
圖4：凝膠在QuickBlue快速染膠液中浸泡過(guò)夜效果圖
圖5 ：為圖4中的凝膠在水中洗2h 后的效果圖
圖6：客戶反饋實(shí)驗(yàn)圖
圖7：QuickBlue快速染膠液
貨號(hào)：BF06152
規(guī)格：500ml
價(jià)格：540 RMB
公司簡(jiǎn)介
Biodragon是一家由留學(xué)歸國(guó)人員創(chuàng)辦的生命科學(xué)領(lǐng)域技術(shù)研發(fā)型企業(yè)，專業(yè)從事新型生化試劑的研發(fā)和銷售。公司理念是通過(guò)自主創(chuàng)新的品牌產(chǎn)品改變傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ剑股茖W(xué)研究變得更輕松、更高效。公司成立八年多來(lái)推出了上萬(wàn)種自主品牌產(chǎn)品，其中包括QuickAntibody?免疫佐劑、QuickShuttle?轉(zhuǎn)染試劑、QuickFreezing?細(xì)胞凍存液、QuickVerification?膠體金檢測(cè)卡、Hybridoma Feeder添加因子和Pan-HPV? HPV L1抗體等多種獨(dú)特的自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)產(chǎn)品。秉承“專業(yè)、創(chuàng)新”的理念，公司將繼續(xù)在擅長(zhǎng)專業(yè)領(lǐng)域做強(qiáng)做大，為客戶提供更多的創(chuàng)新產(chǎn)品和服務(wù)，力爭(zhēng)成為國(guó)際知名的品牌生化試劑公司。
公司主要產(chǎn)品有抗體制備全套產(chǎn)品、病毒包裝相關(guān)產(chǎn)品、2萬(wàn)多種科研用抗原抗體、近300種病理級(jí)抗體、近3000余種病毒蛋白及病毒抗體，另有WB、IHC、ELISA、細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑及諸多特色產(chǎn)品和特色技術(shù)服務(wù)。
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