一、細胞凍存
細胞凍存是生物實驗中經常使用的方式,也是細胞保存的主要方法之一。連續培養的細胞系容易發生遺傳突變,已經建立好的特定細胞系對研究人員來說是非常寶貴的,還有對于來不及篩選的陽性雜交瘤細胞等等,細胞的凍存存儲都是十分必要的。常規細胞凍存技術將細胞用凍存液重懸后,經過一定方式的梯度降溫,最后置于液氮中超低溫保存,可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來,在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。
1、細胞凍存中的問題
細胞這一微小生命體的主要成份是液態的水,其結構精巧復雜,內部任何的物理損傷對于它都是十分嚴重的。低于零度的條件下水會結冰。懸浮在純水中的細胞,隨著溫度的降低,細胞內外的水份都會結冰,所形成的冰晶會造成細胞膜和細胞器的破壞,從而引起細胞死亡,這種因細胞內部結冰而導致的細胞損傷稱為細胞內冰晶的損傷。如果將細胞懸浮在溶液中,隨著溫度的降低,細胞外部的水分會首先結冰,從而使得未結冰的溶液中電解質濃度升高。若細胞暴露在這樣高溶質的溶液中且時間過長,細胞膜上脂質分子會受到損壞,細胞便發生滲漏,在復溫時,大量水分會因此進入細胞內,造成細胞死亡。這種因保存溶液中溶質濃度升高而導致的細胞損傷稱為溶質損傷。如果在溶液中加入冷凍保護劑,則可保護細胞免受溶質損傷和冰晶損傷。
細胞凍存和復蘇一般采用“慢快融”的方法,該方法能較好地保證細胞存活率。細胞凍存的原則是慢凍,主要是防止細胞在冷凍過程中形成冰晶,對細胞造成損害,慢凍一般是分別經過4度,-20度,-80度過夜,再轉移到液氮的梯度降溫;復蘇細胞的原則是快融,在復蘇時,一般以很快的速度升溫,1-2分鐘內即恢復到常溫,細胞內外不會重新形成較大的冰晶,也不會暴露在高濃度的電解質溶液中過長的時間,從而無冰晶損傷和溶質損傷產生,凍存的細胞經復蘇后仍保持其正常的結構和功能。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外,減少細胞內冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法,這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。

2、常規細胞凍存方式的缺點
常規細胞凍存液包含了細胞凍存所需的所有組分,主要成分是DMEM、胎牛血清及二甲基亞砜(DMSO)等,DMSO是常用的細胞冷凍保護劑,其分子量小、溶解度大、細胞膜通透性好,能夠快速穿透細胞膜進入細胞,降低冰點、延緩凍存過程,同時提高細胞膜通透性,提高細胞內離子濃度,減少細胞內冰晶的形成,從而減少細胞損傷達到保護細胞的目的。(1)傳統4℃、-20℃、-80℃過夜、轉液氮罐的手動梯度降溫方式,操作步驟多,耗時耗力。
(2)程序性降溫盒價格高,占用-80℃冰箱空間,且一般含有異丙醇,難清理。
(3)細胞最后需要轉移到液氮罐中保存,液氮罐一般有專人管理,放樣取樣多有不便。
(4)傳統凍存液含有血清成分,存在微生物污染風險,且批次不穩定。
二、QuickFreezing 細胞凍存液
Biodragon研發的具有自主知識產權的特色產品:QuickFreezing細胞凍存液,具有諸多優勢:
(1)無需繁瑣耗時的程序性降溫,可以直接放于-80℃冰箱,可長期保存
(2)無血清,無蛋白,化學組成明確,批次穩定
(3)不會引入造成細胞污染的外源因子
(4)使用常規含血清凍存液容易聚團的細胞,如293細胞等,非常適合用本產品
為了方便客戶更好的使用,北京博奧龍公司還對產品的包裝規則進行了特別的設計:
(1)包裝設計為10ml×5,無需再次分裝,在使用過程中不易造成不同使用者或不同細胞間的交叉污染。
(2)特別為使用96孔板等凍存細胞的客戶,提供QuickFreezing-2×M細胞凍存液規格,其為普通細胞凍存液兩倍濃度,客戶可直接從96孔板中置換一半體積的凍存液進去,即可直接放入-80℃冰箱凍存,簡便快捷。
說明:若-80℃冰箱開閉頻繁,會導致冰箱局部溫差,影響細胞凍存效果,保存時間超過半年以上或珍貴細胞種子樣品,建議由-80℃冰箱轉移到液氮存儲!
| 貨號 | 名稱 | 特點 | 規格 |
| KX0310041 | QuickFreezing-M | 常規哺乳動物專用 | 5×10ml |
| KX0310041-30 | 30ml | ||
| KX0310041-100 | 100ml | ||
| KX0310042 | QuickFreezing-2×M | 整板凍存專用 | 5×10ml |
| KX0310042-30 | 30ml | ||
| KX0310042-100 | 100ml | ||
| KX0310043 | QuickFreezing-I | 昆蟲細胞專用 | 5×10ml |
| KX0310043-100 | 100ml |
三、公司簡介
Biodragon是一家由留學歸國人員創辦的生命科學領域高新技術企業,專業從事新型生化試劑的研發和銷售。公司理念是通過自主創新的品牌產品改變傳統實驗模式,使生命科學研究變得更輕松、更高效。公司成立八年多來推出了上萬種自主品牌產品,其中包括QuickAntibody?免疫佐劑、QuickShuttle?轉染試劑、QuickFreezing?細胞凍存液、QuickVerification?膠體金檢測卡、Hybridoma Feeder添加因子和Pan-HPV? HPV L1抗體等多種獨特的自主知識產權產品。秉承“專業、創新”的理念,公司將繼續在擅長專業領域做強做大,為客戶提供更多的創新產品和服務,力爭成為國際知名的品牌生化試劑公司。
公司主要產品有抗體制備全套產品、病毒包裝相關產品、2萬多種科研用抗原抗體、近300種病理級抗體、近3000余種病毒蛋白及病毒抗體,另有WB、IHC、ELISA、細胞培養相關試劑及諸多特色產品和特色技術服務。
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