人血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1 (TSP-1)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書
本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中人血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1 (TSP-1)含量。注：本產(chǎn)品僅供科研使用！
實(shí)驗(yàn)原理：
????本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1 (TSP-1)水平。用純化的人血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1 (TSP-1)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1 (TSP-1)，再與HRP標(biāo)記的血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1 (TSP-1)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1 (TSP-1)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1 (TSP-1)濃度。
試劑盒組成：
|
試劑盒組成 |
??????48孔配置 |
96孔配置 |
保存 |
|
說(shuō)明書 |
1份 |
1份 |
? |
|
封板膜 |
2片（48） |
2片（96） |
? |
|
密封袋 |
1個(gè) |
1個(gè) |
? |
|
酶標(biāo)包被板 |
1×48 |
1×96 |
2-8℃保存 |
|
標(biāo)準(zhǔn)品：270?ng/ml |
0.5ml×1瓶 |
0.5ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
|
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
1.5ml×1瓶 |
1.5ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
|
酶標(biāo)試劑 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
|
樣品稀釋液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
|
顯色劑A液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
|
顯色劑B液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
|
終止液 |
3ml×1瓶 |
6ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
|
濃縮洗滌液 |
（20ml×20倍）×1瓶 |
（20ml×30倍）×1瓶 |
2-8℃保存 |
?
樣本處理及要求：
1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3.尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
操作步驟
1.?標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180?ng/ml，120ng/ml?，60ng/ml，30ng/ml，15ng/ml）。
2.?加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3.?溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.?配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5.?洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.?加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。