病理學技術是病理學診斷的基礎,病理學技術的發(fā)展主導著病理診斷學的發(fā)展。最初我們談論診斷,都是從形態(tài)學、組織學水平或生化水平來看的。病理學是研究疾病發(fā)生發(fā)展規(guī)律的學科,主要的研究范圍是疾病發(fā)生發(fā)展過程中組織、細胞代謝、功能及結構的變化。 染色實驗前期的組織處理對于最后的染色結果是很重要的,組織處理注意事項涉及多個環(huán)節(jié),包括取材、固定、脫水、透明、浸潤、包埋、切片、染色等步驟。
組織取材與固定
1、取材時應選擇新鮮、大小適中的組織塊,避免擠壓變形,保盡量保持組織的原有形態(tài)和清潔。組織塊力求小而薄(一般不超過2×1.5×0.3cm為宜)。
2、固定是關鍵步驟,通常使用10%甲醛溶液或其他固定液(如Carnoy固定液等),固定時間根據組織塊大小確定(一般不宜超過24h),以防止組織自溶或腐敗。
3、固定液的選擇對后續(xù)染色效果有重要影響,例如Bouin's 固定液比較適用于染色效果好的組織。
組織固定的目的
1、破壞細胞內的溶酶體酶:組織離體后,失去氧的供應,細胞就會死亡并釋放出溶酶體酶將細胞溶解,導致組織自溶。因此,組織固定的目的首先是立即殺死細胞并將溶酶體酶及膜結構固定,防止細胞自溶。
2、殺死外來細菌:組織離體后失去活力,如不及時固定,將成為一個良好的細菌培養(yǎng)基,在室溫下極易使細菌生長繁殖,導致組織腐壞。
3、盡可能保持細胞活體時的原狀:活細胞時的微細結構,核在有絲分裂的形態(tài),細胞內含物的裝置等,都要通過固定來完成。
4、凝固、沉淀細胞內原有的產物:細胞是由蛋白質、糖、脂類、各種無機鹽和色素等組成,在固定過程中盡可能保持各種物質的不溶性或不被丟失,以利于在染色后顯示出來。
5、使組織保持一定的硬度和彈性:在以后的脫水、透明、浸蠟等過程中不發(fā)生較大的扭曲和變形。
6、有利于區(qū)別各種細胞的折光率:固定使不同細胞或細胞內各種物質產生不同的折光率,在染色后有利于識別各型細胞的結構。
7、對組織的分析性染色起媒染作用:如用苦味酸的固定液固定組織可使結締組織染色特別鮮艷等。
8、保存組織細胞內的抗原性:細胞內抗原性能完好保存,有利于免疫組化染色時的抗原抗體結合反應。
組織固定的注意事項
1、固定及時性:組織離體后,必須立即固定(在1小時內)。
2、固定液的選擇:應該根據制作要求選擇合適的固定液。
3、固定液用量:必須大于組織體積的4-10 倍。
4、固定液濃度:濃度必須準確,過稀或過濃都會影響組織的形態(tài)和固定的效果。
5、固定溫度:室溫或放于35-37℃的全封閉組織處理機內,溫度過高,會加快組織的自溶和組織的過度收縮,并破壞細胞內的抗原和DNA。
6、固定時間:新鮮標本,應該剖開固定12-24小時后再取材。大標本取材后在室溫下還需再固定4-6小時,小標本取材后應該在室溫下再固定3-4小時,如果是新鮮小標本取材,必須再固定4-8小時。如果室內溫度低,固定時間還需延長。固定時間不超過48小時。
7、需要做分子病理的標本,從標本離體至組織脫水開始,總固定時間一般不要超過24小時(厚度2mm),同時決不要少于6小時。
Bouin's 固定液
產品編號:BL-G016
主要成分:PA、甲醛、乙酸 應用范圍:細胞和組織的固定 Bouin's 固定液常用于固定細胞和組織,以便進行后續(xù)的染色、觀察和分析。
常用于免疫組化和染色、病理學研究及胚胎學研究等。 Bouin's 固定液還被用于一些特殊實驗中。例如,在研究雞法氏囊的顯微結構時,Bouin's 固定液被用于固定組織并進行光鏡觀察。此外,Bouin's 固定液也被用于整體染色法中,以節(jié)省人力和物力。
戊二醛固定液(2.5%,電鏡專用)
產品編號:BL-G014
主要成分:戊二醛、磷酸鹽、去離子水等組成 pH7.2~7.4。
應用范圍:
電鏡標本制備:戊二醛固定液廣泛用于電鏡標本的固定,能夠有效保存細胞和組織的原有形態(tài)結構,防止自溶和細菌感。
細胞生物學研究:適用于細胞核、細胞漿等細微結構的固定,常用于透射電鏡觀察
病理學研究:用于病理組織的固定,保持組織的超微結構清晰度
科研實驗:作為科研試劑,用于各種生物學和醫(yī)學研究。
