血清作為細胞實驗中通用且關鍵的補充劑,其核心作用可從營養供給、細胞保護、代謝調節等維度展開。血清用對了可以使得后續的實驗過程和結果事半功倍;但當血清使用不當,最后的結果會讓我們苦不堪言!
那么,我們在日常的血清使用過程真的萬無一失了么?快來參考一下我們總結匯總的一些血清試用的細節和技巧,別讓細節問題影響到最后的實驗的成敗!
下面列舉一些大家日常血清使用錯誤,并為大家梳理血清正確的使用步驟和過程。
最讓大家煩惱的是血清的解凍,解凍時間久,過程復雜。但是最后的結果可能也會讓人難以接受。
在日常實驗室薪火相傳,秘籍也會隨著時間的流逝發生不可預期的偏離。走正常“修仙”大道,費時費力;但一次的簡化會帶來諸多的方便,相反的“創新”也可能會引起不可挽回的損失。
例如一些操作者會將-20℃冰箱冷凍的血清直接放入37℃水浴鍋快速解凍,內心暗自竊喜(又好又快)。可最后最容易造成的結果就是有蛋白析出,血清出現沉淀。當然并不是這樣做一定會出現這樣的問題,但后續出一次問題造成的影響是不可逆的。那么血清融化的正確操作是:溫度梯度融化,將血清從-20℃冰箱取出轉入4℃冰箱保存過夜,次日部分融化,再轉入室溫條件下保存30min,再轉入37℃水浴鍋中水浴,每半小時輕微搖晃均勻避免局部受熱不均導致蛋白物質析出。
另外一個也是常見且容易被各位“大能”所忽視的,就是血清的保存,包括冷凍和解凍兩種狀態。先明確正確的保存方式:長保存是需要放在-20℃冰箱或者冷庫儲存;另外融化的血清建議分裝好少量臨時用的短時間內4℃保存。
若-80℃長期保存在解凍過程會由于溫差大,會導致血清沉淀大量析出。若血清解凍后長時間4℃保存會導致血清成分降解或沉淀形成 ,因子降解會導致后續使用效果嚴重偏離預期結果。若正常保存\融化的血清中出現部分沉淀,可以通過3500rpm/min離心10min除去。
第二個是關于血清滅活這個操作過程,很多操作者會習慣性地將血清直接放置于56℃水浴,直至完全滅活。這里要明確一下熱滅活過程可能帶來的影響,首先是長時間的高溫加熱會引起生長因子、維生素等的講解,其次是56℃水浴加熱也會破壞蛋白質結構引起蛋白質變性最終形成絮狀沉淀等(該現象屬于正常,合理操作下不影響血清使用)。那么,正確的血清滅活方式是依照上文中提到的血清融化方式融化后,再轉入56℃水浴30分鐘,過程中需要輕微混勻,避免受熱不均影響產品效果。
第三點,就是常見的血清的替換過程。很多實驗人員會直接進行血清的替換,但是后續的結果卻與預期不一致。正確的血清替換過程需要進行梯度的替換,具體操作如下: A、原血清與新血清按照3:1的體積混合后,再配制細胞所需的完培,培養細胞; B、原血清與新血清按照1:1的體積混合后,再配制細胞所需的完培,培養細胞; C、原血清與新血清按照3:1的體積混合后,再配制細胞所需的完培,培養細胞; D、原血清與新血清按照0:1的體積混合后,再配制細胞所需的完培,培養細胞; 通過平緩的過度增加細胞對新血清的適應程度。正確的使用血清會讓我們的實驗事半功倍,同樣也會減輕我們的很多的工作量。
如果您正在面臨相關的問題,可以參照上述的幾點進行調整,不要讓不規范使用胎牛血清成為實驗路上的絆腳石。
