人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)ELISA試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關液體樣本中人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的含量。注：本產品僅供科研使用！
實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平。用純化的人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL) 抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被抗原的微孔中依次加入氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)，再與HRP標記的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)濃度。
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試劑盒組成：
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試劑盒組成 |
48孔配置 |
96孔配置 |
保存 |
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說明書 |
1份 |
1份 |
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封板膜 |
2片（48） |
2片（96） |
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密封袋 |
1個 |
1個 |
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酶標包被板 |
1×48 |
1×96 |
2-8℃保存 |
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標準品：270μg/L |
0.5ml×1瓶 |
0.5ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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標準品稀釋液 |
1.5ml×1瓶 |
1.5ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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酶標試劑 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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樣品稀釋液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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顯色劑A液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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顯色劑B液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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終止液 |
3ml×1瓶 |
6ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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濃縮洗滌液 |
（20ml×20倍）×1瓶 |
（20ml×30倍）×1瓶 |
2-8℃保存 |
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樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.?標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180μg/L，120μg/L?，60μg/L，30μg/L， 15μg/L）。
2.?加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動
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