森貝伽生物:raw264.7細胞培養建議-自主發布-資訊-生物在線

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森貝伽生物:raw264.7細胞培養建議

作者:南京森貝伽生物科技有限公司 2022-07-05T14:32 (訪問量:13988)

一、細胞概述

RAW264.7中文全名為小鼠單核巨噬細胞白血病細胞,來源于雄性Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤,是常用的炎癥細胞模型之一,常見于研究細胞吞噬、細胞免疫、分子免疫學。

RAW 264.7 是一種單核細胞/巨噬細胞系,具有松散貼壁的立方形或紡錘形細胞和圓形活細胞。細胞松散附著、堆積并變圓是正常的,尤其是在培養密集時。活細胞可以分離和漂浮,特別是當培養物變得更加融合時。這些未附著的細胞仍然有活力,應通過溫和離心保留下來,然后重新加入燒瓶中。不同批次血清的細微差異會導致 RAW 264.7 細胞或多或少的附著。我們使用未經熱滅活的優質血清,因為熱滅活可以減少附著因子和生長因子。

二、細胞培養條件

三、細胞培養建議

1、細胞復蘇:將含有1m細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5ml培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心3min,棄去上清液,補加4-6ml完全培養基吹勻。然后將細胞懸液加入培養瓶中過夜,第二天檢查細胞密度并換液。

2、細胞傳代:當細胞密度達到80%-90%,即可進行傳代培養。

2.1棄去培養液上清,用不含鈣、鎂離子的PBS(BC-BPBS-01) 潤洗細胞2次。

2.2加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-EDTA)BC-CE-005 于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2min,鏡下觀察細胞大部分圓縮并脫落,肉眼觀察細胞培養瓶上部細胞呈掛線狀滑落,迅速拿回操作臺,于手心輕敲幾下培養瓶,可見細胞呈沙粒狀滑落,加5ml以上含10%血清的完全培養基終止消化。

2.3輕輕吹打細胞,完全脫落分散后吸出,在1000RPM條件下離心3min,棄去上清液,補加1-2ml吹勻。

2.4按5-6ml/瓶補加培養液,將細胞重懸按1:2到1:4的比例分到新的培養瓶中。

3、細胞凍存

凍存條件:20%FBS的培養基+10%DMSO(或使用細胞凍存液BC-CFM-01),2-8℃放置2小時,再將凍存管置于梯度降溫凍存盒并放于-80度過夜,第二天轉入液氮罐;

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