各位科研打工人，你是不是也遇到過原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染不進去的問題？要么轉(zhuǎn)染不進去，要么加大劑量后，轉(zhuǎn)是轉(zhuǎn)進去了，但細(xì)胞死了一大片。那么今天，我們就來聊聊實驗室里最讓人頭痛的話題——原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染。
原代細(xì)胞，是指直接從生物體組織分離培養(yǎng)的細(xì)胞，它們保持著最接近體內(nèi)狀態(tài)的特性，是許多研究的"黃金標(biāo)準(zhǔn)"。但正是這種"原生態(tài)"的特性，讓它們變得格外難伺候：
1.體質(zhì)敏感：離開舒適的體內(nèi)環(huán)境后，對外源核酸更為敏感，會啟動更強的防御機制降解外源DNA/RNA。
2. 環(huán)境適應(yīng)性差：對轉(zhuǎn)染試劑和外來培養(yǎng)基等物質(zhì)不夠適應(yīng)，需要特定的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，通用型轉(zhuǎn)染方案往往水土不服。
3. 增殖有限：增殖能力有限，轉(zhuǎn)染窗口期轉(zhuǎn)瞬即逝。
4. 耐受性差：對于一般細(xì)胞能夠耐受的轉(zhuǎn)染試劑毒性，原代細(xì)胞很可能耐受不了。
5. 實驗重復(fù)性差：即便同批次分離的細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率也可能天差地別，實驗結(jié)果重復(fù)性成謎。
那么，該如何化解這些難題呢？針對原代細(xì)胞的以上特點，我們可以嘗試如下解決方案：
一 試劑選擇有講究：
脂質(zhì)體類試劑通常比陽離子聚合物更溫和，更有利于原代細(xì)胞的存活和核酸的進入；或者優(yōu)先選用專為原代細(xì)胞設(shè)計的轉(zhuǎn)染試劑。
二 把控時機很關(guān)鍵：
在原代細(xì)胞對數(shù)生長期進行轉(zhuǎn)染，此時細(xì)胞生長力旺盛，耐受力較強；細(xì)胞密度要恰到好處(通常70-80%)，太少，不利于細(xì)胞存活，太多，不利于轉(zhuǎn)染成功；避免傳代次數(shù)過多（傳代次數(shù)過多會導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)變差增殖減弱，更不利于轉(zhuǎn)染）。
三 優(yōu)化方案不可少：
必須做劑量梯度預(yù)實驗，每種原代細(xì)胞對于核酸和轉(zhuǎn)染試劑的耐受度、接受度都不一樣，不做預(yù)實驗沒法確定最優(yōu)轉(zhuǎn)染條件；質(zhì)粒純度要保證，高純度質(zhì)粒有利于高效轉(zhuǎn)染，生產(chǎn)質(zhì)粒時可以考慮使用啟動子增強表達(dá)。
四 輔助手段來幫忙：
對于耐受性差的原代細(xì)胞，可在轉(zhuǎn)染后立即更換為新鮮培養(yǎng)基，以延長恢復(fù)時間；對于特別嬌貴的原代細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染前可考慮使用特殊培養(yǎng)因子等，保證細(xì)胞狀態(tài)。
來自前線科研人的血淚建議
我們采訪了多位"轉(zhuǎn)染老手"，總結(jié)出這些肺腑之言：
"不要迷信文獻條件，一定要自己優(yōu)化！"
"記錄每一批細(xì)胞的詳細(xì)信息，找出規(guī)律。"
"準(zhǔn)備Plan B，有些細(xì)胞就是轉(zhuǎn)不進去，換方法比死磕強！"
"保持耐心，原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染本來就是一場持久戰(zhàn)。"
當(dāng)然，如果你希望更加高效、便捷地完成轉(zhuǎn)染，那也是有其他方法的。Arcegen Celthy SureXcel 3000轉(zhuǎn)染試劑——新一代高分子轉(zhuǎn)染試劑，從轉(zhuǎn)染每一步提高成功率！
高效轉(zhuǎn)染：在293T、HeLa、MCF7、HepG2、A549等三十多個細(xì)胞系中驗證，具有強大的轉(zhuǎn)染效率；
廣泛兼容：DNAmRNA/siRNA/miRNA/ASO全類型核酸通用；
毒性極低：新型高分子材料，毒性極低，最大限度提高細(xì)胞存活率。
對于原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染極其適配！
原代巨噬細(xì)胞BMDM質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
使用Celthy SureXcel 3000和競品T*3000同時在原代巨噬細(xì)胞BMDM中轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA，結(jié)果顯示，Celthy SureXcel 3000轉(zhuǎn)染效率優(yōu)于競品T*3000。
原代豬肺泡巨噬細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
使用Celthy SureXcel 3000和競品T*3000同時在原代豬肺泡巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA，結(jié)果顯示，Celthy SureXcel 3000轉(zhuǎn)染效率優(yōu)于競品T*3000。
原代真皮成纖維細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
使用Celthy SureXcel 3000和競品B*8000同時在原代真皮成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA，結(jié)果顯示，Celthy SureXcel 3000轉(zhuǎn)染效率優(yōu)于競品B*8000。
除了原代細(xì)胞，Arcegen SureXcel 3000在mRNA、siRNA轉(zhuǎn)染中也具有優(yōu)秀的轉(zhuǎn)染效果。
mRNA高效轉(zhuǎn)染
使用Celthy SureXcel 3000和競品T*3000同時在多種細(xì)胞中轉(zhuǎn)染mRNA，結(jié)果顯示，在不同細(xì)胞中，Celthy SureXcel 3000表現(xiàn)均優(yōu)于競品T*3000。
siRNA高效轉(zhuǎn)染
使用Celthy SureXcel 3000和競品T*3000同時在多種細(xì)胞中轉(zhuǎn)染siRNA，結(jié)果顯示，在不同細(xì)胞中，Celthy SureXcel 3000表現(xiàn)均優(yōu)于競品T*3000。
現(xiàn)在試用Celthy SureXcel 3000轉(zhuǎn)染試劑，體驗立即提升的細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率！
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| 中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品貨號 |
| Celthy SureXcel 3000轉(zhuǎn)染試劑 | Celthy SureXcel 3000 Transfection Reagent | C130010 |