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BMDM，即骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞（Bone Marrow-Derived Macrophage），是一種從小鼠骨髓中分離并體外誘導(dǎo)分化的原代巨噬細(xì)胞。通常用于藥物篩選或研究特定基因在巨噬細(xì)胞功能中的作用。然而在BMDM中進(jìn)行轉(zhuǎn)染并非易事。

由于BMDM是原代免疫細(xì)胞，增殖能力弱、極易被激活引發(fā)炎癥，且胞內(nèi)核酸酶豐富，會(huì)快速降解外源基因，往往導(dǎo)致常規(guī)方法轉(zhuǎn)染效率極低。

Arcegen推出由新型多聚體高分子材料開發(fā)的升級(jí)版核酸轉(zhuǎn)染試劑：Celthy SureXcel 3000（CAT#C130010），轉(zhuǎn)染效率極高且細(xì)胞毒性極低，能夠滿足各種轉(zhuǎn)染需求，包括BMDM等各類難轉(zhuǎn)染細(xì)胞。

我們今天就來(lái)看下如何進(jìn)行這個(gè)實(shí)驗(yàn)。

所需試劑

實(shí)驗(yàn)步驟

1.DNA轉(zhuǎn)染

注：轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類型及其他實(shí)驗(yàn)條件影響，建議初次使用時(shí)設(shè)置梯度進(jìn)行優(yōu)化最佳使用量。
1） 細(xì)胞鋪板，至轉(zhuǎn)染操作時(shí)，以細(xì)胞融合度達(dá)70%-90%為佳。
2） 按照下表使用Opti-MEM培養(yǎng)基稀釋轉(zhuǎn)染試劑溶液，輕輕混勻。
3） 使用Opti-MEM培養(yǎng)基稀釋DNA，得到DNA預(yù)混液，然后添加Enhancer轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑溶液，輕輕混勻，得到稀釋的DNA。
4） 將稀釋的DNA加入已稀釋的轉(zhuǎn)染試劑溶液中(1:1比例)。
5） 室溫孵育10-15分鐘。
6） 將DNA-轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物逐滴加到細(xì)胞中，輕輕混勻。

2.siRNA轉(zhuǎn)染

轉(zhuǎn)染siRNA操作與DNA的轉(zhuǎn)染操作流程一樣，但在稀釋siRNA時(shí)則不需要加入Enhancer轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑。

3.mRNA轉(zhuǎn)染

轉(zhuǎn)染mRNA操作及用量與DNA的轉(zhuǎn)染操作流程一樣，但在稀釋mRNA時(shí)則不需要加入Enhancer轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑。

不同細(xì)胞培養(yǎng)容器轉(zhuǎn)染用量（僅供參考）：

【注】該表使用量?jī)H供參考，DNA與轉(zhuǎn)染試劑溶液具體使用量還需根據(jù)細(xì)胞類型及其他實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化。

建議使用時(shí)比值保持在1:0.5-1:5之間。其中mRNA的用量及實(shí)驗(yàn)條件和DNA一致；若細(xì)胞比較脆弱，導(dǎo)致細(xì)胞死亡較多，可以通過(guò)將增強(qiáng)劑減半來(lái)獲得更好的結(jié)果。

結(jié)果測(cè)試

使用綠色熒光蛋白（GFP）作為測(cè)試蛋白，通過(guò)熒光顯微鏡及流式細(xì)胞儀進(jìn)行轉(zhuǎn)染效果檢測(cè)。我們使用C130010對(duì)BMDM細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，得到了非常好的結(jié)果，明顯優(yōu)于競(jìng)品。

圖 利用本試劑盒和競(jìng)品T*3000分別對(duì)BMDM進(jìn)行DNA轉(zhuǎn)染結(jié)果圖

產(chǎn)品推薦

Celthy SureXcel 3000轉(zhuǎn)染試劑以低毒性、高效率、廣譜性為核心優(yōu)勢(shì)，成為替代傳統(tǒng)脂質(zhì)體試劑的理想選擇。

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