客戶：“你們發的293T細胞到貨全是飄的！”客戶很生氣，我們很無奈，可以看下圖片對比：
為什么細胞到客戶手上就飄起呢？
首先我們需要剖析這個細胞的特性。
1、消化方式：293T細胞是一個貼壁能力較弱的細胞，一般在傳代過程中0.25%胰酶含edta常溫消化30秒就可以全部消化下來了。
2、傳代比例：這個細胞生長速度較快倍增時間一般是24小時左右，長得比較快，所以傳代比例可以達到1:4左右。
3、生長特性：貼壁生長，隨著細胞匯合度增加細胞會連片生長，當密度高于80%-90%細胞會由于生長空間受限成片飄起。所以需要仔細把握細胞生長密度。
4、培養體系：DMEM高糖＋10% FBS+1% P/S
根據細胞的特性總結下來，293T細胞不貼壁的原因可能有以下幾點：
1、細胞特性：293T細胞是一種貼壁依賴型細胞，但其貼壁能力較弱，容易在培養過程中脫落。這種特性使得在操作過程中需要特別小心，避免液體直接沖擊細胞。
2、 培養條件：293T細胞對培養條件非常敏感，例如DMEM中碳酸氫鈉濃度和培養箱中的CO2濃度需要嚴格控制。如果這些條件不適宜，可能導致細胞貼壁性變差。
3、血清批次差異：不同批次的胎牛血清（FBS）成分差異可能導致細胞貼壁性變差，建議使用相同批次的血清以減少這種影響。
4、 消化操作不當：胰酶消化時間過長或吹打動作過猛會導致細胞受傷，進而影響細胞的貼壁能力。建議控制消化時間和輕柔吹打，以達到80%的融合率。
5、空間隔離：當293T細胞從大瓶轉移到小孔板時，由于空間隔離導致細胞自分泌或旁分泌產生的信號分子濃度降低，不利于細胞的貼壁或增殖。解決辦法是在鋪板前對孔板進行明膠包被處理。
6、傳代次數過多：隨著傳代次數的增加，293T細胞的生長狀態會逐漸下降，出現貼壁不牢的現象。因此，需要及時凍存細胞并保持實驗的穩定性和持續性。
293T細胞不貼壁的原因可能涉及細胞特性、培養條件、血清批次差異、消化操作不當以及傳代次數過多等多個方面。通過優化這些因素，可以改善293T細胞的貼壁性。
如何改善細胞到貨不貼壁情況呢？
1、細胞到貨后現在培養箱里穩定3-4小時，讓細胞適應新的培養環境。
2、穩定后發現細胞還有大量飄起，建議將培養液全部收集起來離心收集細胞，打入原瓶靜置培養，這一步操作時需要注意一下輕柔的將細胞吹散成單個細胞。
3、重鋪靜置培養一天后觀察貼壁情況，將還沒有貼上的細胞再換液時扔掉。