養過RAW264.7的科研人，誰沒被它的“小脾氣”拿捏過？作為免疫學、炎癥研究里的“常客”，這款小鼠單核巨噬細胞看似好養活，實則傳代環節藏著無數坑——稍不注意就分化、極化，先劃重點：RAW264.7絕對禁用胰酶！這類細胞對胰酶極其敏感，一旦接觸，不僅會破壞細胞表面特性，還會直接誘導細胞分化。
除此之外，RAW264.7還有個“玻璃心”特質：傳代時力度稍大、操作稍糙，或者密度過高不傳代，就容易出現極化、分化現象，甚至抱團脫壁，讓人欲哭無淚。
今天就給大家整理了RAW264.7傳代的“全套解決方案”——既有大家熟悉的刮刀傳代，也有常規吹打傳代，輕松避開分化坑，新手也能一次成功！
一：刮刀傳代
這是很多科研人常用的方法，適合細胞密度達到80%-90%，操作簡單但需注意力度，避免損傷細胞。
? 操作要點：
- 從培養箱取出細胞，鏡下確認細胞密度80%-90%、狀態良好，即為最佳傳代時機；
- 培養瓶用75%酒精消毒瓶身，放入超凈臺，輕輕倒掉舊培養液（不要暴力傾倒，避免沖擊細胞）；
3. 加入預熱的新鮮完全培養基，用無菌細胞刮刀輕輕刮拭瓶底，朝一個方向刮，避免來回反復刮，力度以能刮下細胞為宜；
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4. 刮下后用移液管輕柔吹打幾次，將細胞吹散成單細胞懸液，按1:2~1:3比例接種至新培養瓶，做好標記；
5. 鏡下觀察細胞分散均勻后，輕輕搖勻培養瓶，放入37℃、5%CO?恒溫培養箱，完成傳代。
?? 小提醒：刮刀傳代雖高效，避免用力過猛，導致細胞損傷、后續分化，建議操作時放慢速度，刮完后多吹打幾次，盡量吹散細胞團。
二：吹打傳代
吹打傳代無需刮刀，全程用培養基溫和吹打，對細胞損傷小，能很大程度避免細胞分化。
? 操作流程：
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鏡下觀察：取出培養瓶，顯微鏡下觀察，細胞密度達到80%-90%、狀態良好，無明顯分化、無污染物，就是最佳傳代時刻；
2. 消毒入臺：用75%酒精擦拭培養瓶表面，消毒后放入超凈臺，打開瓶蓋，輕輕倒掉瓶內所有舊培養液（動作輕柔，避免晃動瓶底細胞）；
3. 溫和吹打：用移液管吸取預熱的新鮮完全培養基（提前預熱20-30分鐘，避免低溫刺激細胞），沿瓶壁緩慢加入，不要直接沖擊細胞層；
4. 有序操作：手持移液管，沿培養瓶上下、左右各個區域按順序吹打，力度均勻、速度緩慢，避免產生氣泡，直至大部分細胞脫落（采用扇形吹打方式）；
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5. 接種培養：將吹打后的細胞懸液，按比例接種至新的培養瓶，做好細胞名稱、傳代日期的標記；
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6. 鏡下復檢：倒置顯微鏡下觀察，確認細胞分散均勻、密度合適，無明顯細胞團；
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7. 完成傳代：輕輕搖勻培養瓶，將其放入37℃、5%CO?恒溫培養箱，靜置培養即可。
? 第二天反饋：細胞生長狀態極佳，極化細胞少、增殖速度快，貼壁均勻，幾乎沒有分化現象，后續實驗可直接使用。
傳代避坑終極指南
無論選擇哪種傳代方法，記住這4點，能最大程度避免細胞分化、污染，讓RAW264.7穩穩生長。
- 全程禁用胰酶！，胰酶是RAW264.7分化的“頭號殺手”，任何情況下都不要用胰酶消化；
- 操作全程輕柔：吹打力度要均勻，避免暴力吹打、反復刮拭，移液管、刮刀不要觸碰瓶底細胞層，減少細胞機械損傷；
- 嚴控傳代時機和比例：細胞密度達到80%-90%及時傳代，否則細胞易分化；
- 細節把控：培養基提前預熱，避免低溫刺激；超凈臺操作規范，杜絕污染；吹打不下來的細胞大概率是已經分化的細胞，可直接丟棄，無需強行吹打。
其實RAW264.7傳代并沒有那么難，只要抓住“禁用胰酶、全程輕柔”的核心，再根據需求選擇刮刀傳代或吹打傳代。
養RAW264.7的小伙伴，趕緊把這篇收藏起來，下次傳代直接抄作業！
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