外周血單核細胞
外周血單核細胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)是血液中最大的血細胞，單個核細胞是具有單個核的細胞。來源于骨髓中的造血干細胞，并在骨髓中發(fā)育，最終進入血液中隨著血液循環(huán)傳代至全身各個部位。
主要是通過Ficoll-hypaque（聚蔗糖－泛影葡胺）密度梯度離心法，利用不同顆粒之間存在沉降系數(shù)差時，在一定離心力作用下，各自以一定速度沉降，在密度梯度不同區(qū)域上形成區(qū)帶的方法，再獲取目的區(qū)域的細胞。下面簡單介紹一下實驗操作和注意事項。
實驗步驟
1、外周血的獲取和處理：通常從生物體內(nèi)獲取其外周血，并向獲得的外周血中添加抗凝劑（肝素、EDTA、枸櫞酸鈉等）混合均勻，防止血液凝結(jié)；
2、先向離心管中添加適量的Ficoll分離液，再將混合好的外周血輕緩的加入到分離液上方（二者體積比可以使用1:1、2:1等）；
3、配平后放入離心機內(nèi)進行離心，設(shè)置好合適的離心參數(shù)（一般采用1500rpm/min；離心20min；實際需要根據(jù)物種以及添加量進行調(diào)整），注意升速和降速加速度不宜過快；
4、離心結(jié)束后輕緩取出離心樣本，在無菌環(huán)境下吸取白膜(PBMC)層。
注意事項
實驗中需要注意到的細節(jié)也有很多，不同失誤也可能造成不同實驗結(jié)果：
1、離心結(jié)束后，管底紅細胞較多，PBMC層較預(yù)期相差很多：（排除樣本本身的原因）Ficoll分離液需要使用前恢復(fù)至室溫狀態(tài)再進行使用，低溫下Ficoll分離液可能會有固體物質(zhì)析出，導(dǎo)致分離液密度降低，使得分離效果變差，所有細胞沉降至最底層；
補救措施：可以通過收集白膜層及以下所有液體，再加入三倍體積的PBS混合后1500rpm/min離心10min收集所有細胞沉淀再使用原血液樣本等體積的PBS重懸細胞沉淀，重新進行分離進行補救；
2、離心結(jié)束后最上層血漿澄清但白膜層、Ficoll層、紅細胞層分布不均：樣本濃度較高導(dǎo)致過載造成分離效果不佳；
補救措施：可以通過收集白膜層及以下所有液體，再加入三倍體積的PBS混合后1500rpm/min離心10min收集所有細胞沉淀再使用2-3倍體積的PBS重懸細胞沉淀，重新進行分離進行補救；
3、血漿層有絮狀物或呈現(xiàn)偏紅：絮狀物的析出一般為蛋白析出或者為脂肪凝集，偏紅則可能是溶液造成；
補救措施：一般對實驗結(jié)果影響不大，偏紅主要是溶血造成，需要關(guān)注外周血的運輸和保存條件。