科研細(xì)胞在當(dāng)下已經(jīng)成為一個(gè)重要的科研工具，運(yùn)輸成為重中之重，不知道有多少細(xì)胞噶在了路上，今天為大家介紹兩種森貝伽常用的運(yùn)輸方式以及儲(chǔ)存注意事項(xiàng)。
常溫運(yùn)輸
??常溫運(yùn)輸通常采用不透氣瓶進(jìn)行運(yùn)輸，待細(xì)胞生長(zhǎng)至70-80%左右，鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)無異常即可；
??將準(zhǔn)備好的細(xì)胞灌滿培養(yǎng)液，瓶口擰緊，纏上封口膜并用一次性自封袋包裝放入特制泡沫盒即可運(yùn)輸；
??寒冷地區(qū)以及冬季運(yùn)輸需要長(zhǎng)效高溫暖寶寶維持細(xì)胞溫度。
常溫運(yùn)輸收貨注意事項(xiàng)：
（1）及時(shí)拍攝培養(yǎng)瓶外觀記錄有無瓶子破損漏液的情況，去掉封口膜，75%酒精消毒瓶身后放入37℃培養(yǎng)箱靜置3-4h。
（2）在顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（4×，10×，20×各2-3張），作為售后依據(jù)。
（3）懸浮細(xì)胞和半貼壁半懸浮細(xì)胞離心運(yùn)輸?shù)墓嘁号囵B(yǎng)基收集細(xì)胞。
（4）部分貼壁細(xì)胞有脫落或脫落后成團(tuán)的現(xiàn)象，需離心瓶中灌液的培養(yǎng)基收集細(xì)胞。貼壁細(xì)胞鏡下觀察若密度低于60%，可棄除培養(yǎng)基后加入5-8mL新鮮完全培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)；若密度達(dá)80%以上，可對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。收到貨后第一次建議1:2的比例傳代。
（5）運(yùn)輸過程中的灌液培養(yǎng)基不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，需更換新鮮完全培養(yǎng)基。
（6）夏季部分地區(qū)溫度較高，常溫發(fā)貨細(xì)胞不能在沒有空調(diào)的地方房太久，會(huì)影響細(xì)胞代謝，并且有微生物污染風(fēng)險(xiǎn)，一定注意無菌操作。
干冰運(yùn)輸
??細(xì)胞擴(kuò)增好做完一系列檢測(cè)和鑒定后凍存至工作細(xì)胞庫(kù)；
??定期復(fù)蘇檢查細(xì)胞狀態(tài)，準(zhǔn)備兩管放入自封袋貼好標(biāo)簽，埋入放滿干冰的泡沫箱內(nèi)即可打包。
干冰運(yùn)輸注意事項(xiàng)：
（1）開箱后核對(duì)細(xì)胞信息，將凍存管置于干冰上拍照留存，夏季氣溫較高，干冰易揮發(fā)，收到貨后若干冰已經(jīng)揮發(fā)干或凍存管破損開裂，請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。
（2）若當(dāng)天不復(fù)蘇，請(qǐng)將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到液氮罐或-80℃冰箱中。
（3）干冰發(fā)貨為兩只凍存管，請(qǐng)先拿出一管復(fù)蘇，另一管放入液氮保存，復(fù)蘇第一管有問題及時(shí)與我們溝通，在技術(shù)支持指導(dǎo)下復(fù)蘇第二管。
儲(chǔ)存方式
當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到80%-90%，即可傳代培養(yǎng)或凍存。
收集細(xì)胞：
貼壁細(xì)胞：1、吸去培養(yǎng)液，加入不含鈣鎂的PBS，輕輕潤(rùn)洗瓶底1-2次，吸棄PBS；2、加入0.25%胰酶-EDTA消化液（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），鋪勻瓶底放入培養(yǎng)箱中消化1-2min；（部分細(xì)胞貼壁較牢，可采用分步消化：將消化下來的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管終止，在培養(yǎng)瓶中加入胰酶繼續(xù)消化，直至大部分細(xì)胞脫落）3、倒置顯微鏡下觀察大部分細(xì)胞變圓脫落，迅速加入完全培養(yǎng)基終止消化，完培與胰酶比例為2:1；4、輕輕吹打細(xì)胞后吸出轉(zhuǎn)移至離心管中。
懸浮細(xì)胞及半貼半懸細(xì)胞注意收集上清。
離心：收集好的細(xì)胞在1000rpm條件下離心3~5min，離心好后棄除上清液。
凍存液重懸：細(xì)胞按照傳代步驟收集細(xì)胞至離心管并計(jì)數(shù)，根據(jù)計(jì)數(shù)的密度決定細(xì)胞凍存數(shù)量，一般推薦細(xì)胞凍存密度為1×106-1×107個(gè)活細(xì)胞/管。離心后棄上清，加入配制好的凍存液重懸，分配到凍存管中，每管1mL。
凍存：將凍存管放入程序降溫盒中進(jìn)行梯度降溫，然后放入-80℃冰箱降溫，24h后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐中。若沒有凍存盒，可于冰箱4℃放置30min，隨后轉(zhuǎn)移至-20℃冷凍2h，接下來將其放于-80℃超低溫冰箱中過夜，最終放置于液氮中以長(zhǎng)期保存。
通過以上步驟和注意事項(xiàng)，可以有效保證細(xì)胞在寄送過程中的穩(wěn)定性和活性，從而確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和可重復(fù)性。