在細胞培養中,培養基、胎牛血清是促進細胞生長,PBS緩沖液是用于清洗細胞或是配置相關溶液,還有一種試劑,是在整個細胞培養過程中不可或缺的,那就是胰蛋白酶消化液。現在市面常見的胰蛋白酶大致可以分為兩種,動物源性的胰蛋白酶和重組胰蛋白酶(非動物源性胰酶)。
現在市面上廣泛使用的動物源性的胰蛋白酶主要是提取自牛或豬的胰腺組織,動物細胞表面很多和培養皿結合的蛋白都是帶有鈣或者鎂離子的蛋白,而胰酶能夠降解這種帶有鈣或者鎂離子的蛋白,因此它可以將細胞膜上和培養皿壁結合的蛋白降解,從而使細胞從培養皿壁脫離。胰酶中常含的EDTA能夠螯合這些鈣鎂離子,從而促進消化。
動物源性胰蛋白酶可在-20℃下保存一年。隨著時間延長,胰酶的消化能力減弱。胰酶可分裝凍存,在使用前從-20℃冰箱取出。盡量避免在4℃長期保存。
在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長,否則細胞鋪板后生長狀況會較差。具體的消化時間要根據細胞特性操作。
在消化細胞時,消化了很長時間,但細胞仍然難以脫離細胞瓶,可能是由于胰酶活性不足、血清抑制、高匯合度和酶無法進入細胞基質。需要更換使用新鮮批次的胰酶,徹底清洗移除血清,并在低細胞濃度時解離細胞。
細胞消化后出現培養時細胞聚團結塊,需要排查是否是因為使用了高濃度胰酶,操作時過度吹打,或者是較長時間的離心都有可能會造成的這種情況。可以在消化時鏡下觀察細胞消化的狀態,操作過程中注意吹打力道,接種細胞時可以將成團的細胞輕微吹散。
部分客戶在收到商家發貨的含酚紅的胰蛋白酶后,會發現顏色有偏橙色,除卻暴力運輸、漏液污染等可能因素外,還有一種可能性是因為保存條件的影響導致。針對干冰運輸過程中導致的 pH 值的變化,BC實驗室對干冰運輸導致的胰蛋白酶顏色異常進行過長期的跟蹤驗證,發現胰酶的運輸通常是使用干冰維持低溫,干冰揮發的二氧化碳于胰酶中溶解的二氧化碳可能會存在極少部分的氣體交換,導致溶液 pH 偏移。而酚紅在胰酶溶液里作為 pH 指示劑,因此胰酶 pH 的變化是肉眼可觀察到的。通過 pH 值測定我們發現:pH 會從 7.2-7.4 變化到 6.7 左右。結果顯示干冰運輸導致的顏色變化對胰酶的消化作用及對細胞活率沒有影響,變色的胰酶仍能很好的應用于細胞消化。

當然了,如果發現胰酶變色的同時還伴有異味或者有明顯沉淀物,也需要排查是否是因為污染導致,不確定的情況下還是建議和廠家確認后再進行使用,以免影響細胞狀態。
