病理染色是我們?cè)谂R床診斷以及科研實(shí)驗(yàn)中最常用到的一種診斷方式，其中較為常用的技術(shù)手段會(huì)有石蠟切片以及染色液染色。只有將各個(gè)部分都保質(zhì)保量地完成制作后，才可以得到理想中的病理染色切片，從而獲得精準(zhǔn)的診斷結(jié)果以及進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。但是我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中，病理切片的質(zhì)量總會(huì)因?yàn)楦鞣N情況難保出現(xiàn)參差不齊的情況，所以，我們搜集各類相關(guān)文獻(xiàn)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，給大家整理歸納出了石蠟切片以及染色液染色中會(huì)出現(xiàn)的一些常見(jiàn)問(wèn)題，并且按照每一種出現(xiàn)的情況來(lái)進(jìn)行深入的原因討論，尋求針對(duì)的解決方案。
由于實(shí)驗(yàn)中導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)誤差的原因多種多樣，我們給出的問(wèn)題出現(xiàn)原因以及處理辦法僅供參考，具體情況同樣需要根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行判斷。
1、蘇木素染色過(guò)淡：染色后的切片鏡下觀察細(xì)胞核顏色暗淡蒼白。此類情況可能是因?yàn)樘K木素在染色是在切片停留時(shí)間不足，導(dǎo)致，也有可能是因?yàn)樘K木素在使用前被氧化，從而導(dǎo)致了染色能力的下降。
解決方案：在遇到此類情況首先我們可以重新制作切片之后再染色，針對(duì)性增加蘇木素染色液的染色時(shí)間，同時(shí)也可以將pH值通過(guò)酸性溶液適當(dāng)調(diào)低，從而可以增加蘇木素染色的針對(duì)性。
2、核染出現(xiàn)紅棕色：此類情況第一種是因?yàn)樘K木素在使用前出現(xiàn)了過(guò)度氧化，從而導(dǎo)致了在進(jìn)行核染時(shí)出現(xiàn)切片的反藍(lán)不夠，第二種情況就是在使用伊紅染色時(shí)出現(xiàn)失誤導(dǎo)致細(xì)胞核染色也被伊紅覆蓋。
解決方案：此類情況需要在染色前就檢查蘇木素的品質(zhì)情況，如果發(fā)現(xiàn)蘇木素出現(xiàn)嚴(yán)重的氧化情況，需要盡快更換新鮮蘇木素，在染色后的反藍(lán)也需要保證時(shí)間充分。
3、伊紅染色不著色：染色切片在鏡下觀察發(fā)現(xiàn)伊紅染色的部分顏色過(guò)淡甚至不著色，此類情況主要是因?yàn)橐良t染色液中pH值超過(guò)了核定水平，或者是切片時(shí)太薄，導(dǎo)致染色后顏色過(guò)淺，還有情況是在乙醇脫水時(shí)停留過(guò)久，洗去了部分未完全染色的伊紅染液。
解決方案：不著色的情況首先需要先檢測(cè)伊紅染色液的pH值，染色液的pH值受到實(shí)驗(yàn)情況的影響較大，所以需要在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前對(duì)于染色液進(jìn)行檢測(cè)，在pH值升高的情況下就會(huì)導(dǎo)致染色效果變差。同時(shí)還需要對(duì)于切片厚度進(jìn)行檢查，如果過(guò)薄的石蠟切片會(huì)導(dǎo)致在酒精中脫水時(shí)稀釋其中的顏色。在藍(lán)化后需要將其中的溶液完全清洗干凈后再進(jìn)行下一步染色操作。
4、鏡下觀察起水霧：在鏡下觀察時(shí)切片有凝集的水珠，或者是有霧氣存在，此類情況主要是在切片染色后未完全脫水，或者是沒(méi)有按步驟進(jìn)行脫水，從而導(dǎo)致最后鏡下觀察水分不能全部排出。
解決方案：首先要將蓋玻片移去后將固定物進(jìn)行溶解，然后再在乙醇中重新進(jìn)行脫水，連續(xù)脫水后再次固定就可以解決此類問(wèn)題。
5、切片脫蠟有白點(diǎn)：此類情況主要表現(xiàn)是脫蠟后切片中出現(xiàn)白色的斑點(diǎn)，此類情況出現(xiàn)的可能原因是在烤片是溫度不夠，時(shí)間不足導(dǎo)致切片未完全干燥，還可能是二甲苯未按規(guī)定時(shí)間在切片上停留，導(dǎo)致脫蠟不完全。
解決方案：此類情況需要保證完全的烤片時(shí)間，將其中的水分清除干凈后再進(jìn)行下一步操作。如果過(guò)烤可能會(huì)導(dǎo)致整個(gè)切片報(bào)廢，時(shí)間需要適當(dāng)控制，同時(shí)對(duì)于脫蠟時(shí)間樹(shù)妖控制完全，如果脫蠟時(shí)間不完全，也會(huì)導(dǎo)致切片中出現(xiàn)白色斑點(diǎn)，此類情況可以通過(guò)漂白來(lái)重新進(jìn)行染色。
6、蘇木素染色過(guò)深：此類情況的出現(xiàn)會(huì)導(dǎo)致染色液擠占細(xì)胞中細(xì)胞質(zhì)的位置，這種情況主要會(huì)有三種情況，第一種是蘇木素在使用中分步驟處理時(shí)時(shí)間太短；第二種情況是蘇木素染色時(shí)染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，導(dǎo)致顏色過(guò)深；第三種情況是因?yàn)樘K木素的pH值偏高，導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)也被染色。
解決方案：蘇木素過(guò)染的情況首先要檢查石蠟切片是否過(guò)厚，如果過(guò)厚需要重新切片染色，如果不是切片問(wèn)題，需要適當(dāng)縮短蘇木素的染色時(shí)間，并將分化適當(dāng)延長(zhǎng)。
7、切片出現(xiàn)沉淀物：切片中的沉淀物一會(huì)是藍(lán)黑色的表現(xiàn)，此類情況是由于蘇木素在染色時(shí)會(huì)有一層金屬膜，此類金屬膜操作不當(dāng)會(huì)附著在切片上影響觀察。
解決方案：切片中有藍(lán)黑色的斑點(diǎn)主要是因?yàn)槿旧褐械某恋恚谌旧翱墒褂眠^(guò)濾膜進(jìn)行過(guò)濾，同時(shí)需要檢查是否有金屬膜附在溶液表面。
8、細(xì)胞質(zhì)紅色過(guò)染：此類情況的出現(xiàn)主要是因?yàn)槠渲械囊良t染色液溶液濃度過(guò)高，并且染色后脫水處理時(shí)未完全脫水，導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)過(guò)染，還有可能是伊紅染色液染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。
解決方案：可以將伊紅染色適當(dāng)延長(zhǎng)，并且在乙醇脫水時(shí)可將時(shí)間適當(dāng)延長(zhǎng)。
9、染色時(shí)染色不均：染色后出現(xiàn)部分斑點(diǎn)或者是大多數(shù)均分布不均，染液會(huì)散布在切片周遭，導(dǎo)致核內(nèi)染色以及細(xì)胞質(zhì)的染色分布受到影響。
解決方案：此類情況最可能的就是因?yàn)槿旧潭〞r(shí)間不足，導(dǎo)致染色出現(xiàn)不均勻情況。在分化時(shí)需要進(jìn)行充分抖動(dòng)，抖動(dòng)不均也會(huì)導(dǎo)致染色不均。
10、染色細(xì)胞核藍(lán)灰：在染色過(guò)程中細(xì)胞核顏色狀態(tài)不對(duì)，其中出現(xiàn)的情況可能會(huì)是由于在染色過(guò)程中加溫臺(tái)的溫度設(shè)置過(guò)高，在固定組織的時(shí)候時(shí)間未完全達(dá)標(biāo)，導(dǎo)致組織固定不充分。
解決方案：此類情況可能是因?yàn)榻M織沒(méi)有與石蠟充分接觸或者是在石蠟溶液中停留時(shí)間較長(zhǎng)，可以將組織包埋后放在冷風(fēng)下進(jìn)行冷凝后重新融化石蠟包埋，如果是停留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，可以重新進(jìn)行脫水處理。
本次整理歸納了HE染色液的常見(jiàn)的10種問(wèn)題，相對(duì)來(lái)說(shuō)每一種問(wèn)題出現(xiàn)的次數(shù)并不一致，有些會(huì)時(shí)長(zhǎng)出現(xiàn)，有些出現(xiàn)的次數(shù)并不是很多，但是這10種問(wèn)題對(duì)于科研中研究病理切片以及醫(yī)院中直接進(jìn)行臨床診斷會(huì)有直接的影響，我們搜集整理的此類問(wèn)題的解決方案希望能夠給大家一些幫助。