支原體污染對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)造成各種有害影響，成為細(xì)胞培養(yǎng)過程中的一個(gè)重要問題。保守估計(jì)，常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)中的污染率在15%到35%之間，大大降低了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。因此，定期檢測和根除支原體對(duì)于確保細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中不存在支原體并獲得準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)至關(guān)重要。經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，Arcegen推出了一種全面的支原體清除解決方案。
支原體是什么？
支原體(Mycoplasma)，迄今發(fā)現(xiàn)的最小和最簡單的原核生物，直徑為0.1-0.3 μm。它們可以很容易地通過過濾器并污染培養(yǎng)系統(tǒng)，表現(xiàn)出高度的多形性，具有多種形式，如球形、桿狀、絲狀和分支狀。
Figure 1. Morphology and Characteristics of Mycoplasma
支原體污染的后果
由細(xì)菌和真菌引起的污染相對(duì)容易檢測、預(yù)防和清除。然而，由支原體引起的污染難以檢測；即使當(dāng)生長密度達(dá)到107-109 CFU/毫升時(shí)，通常也沒有可見的污染跡象(如濁度、pH值變化等)。).
Figure 2. Changes in Cellular States Associated with Mycoplasma Contamination
支原體污染的來源
1.細(xì)胞間的交叉污染。
2.工作環(huán)境或?qū)嶒?yàn)室設(shè)備的污染。
3.實(shí)驗(yàn)者的無菌技術(shù)差。
4.培養(yǎng)基或其他試劑的污染。
5.用于細(xì)胞制備的原始組織或器官的污染。
細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)支原體污染怎么辦？
Figure 3. Comprehensive Solution for Mycoplasma Contamination
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的解決方案
1. 支原體檢測
1）One-step Isothermal Mycoplasma Detection一步法恒溫支原體檢測
Arcegen的一步等溫支原體檢測試劑盒利用獨(dú)特的等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，具有更強(qiáng)的顏色辨別能力，從藍(lán)紫色(陰性)過渡到天藍(lán)色(陽性)，便于視覺識(shí)別。它包括額外的防污染組件，以消除假陽性結(jié)果。
Figure 4. Workflow of One-step Mycoplasma Detection Procedure
2）PCR技術(shù)的支原體檢測
Arcegen基于PCR的支原體檢測方法與傳統(tǒng)的一步PCR檢測方法不同，它將引物對(duì)的數(shù)量從1個(gè)增加到3個(gè)，目標(biāo)是支原體16S和23S rRNA的保守區(qū)域。這種巢式PCR擴(kuò)增提高了靈敏度，同時(shí)減少了非特異性擴(kuò)增，允許以低至單個(gè)拷貝的水平檢測支原體。
Figure 5. Gel Electrophoresis Image of PCR Amplification with Mycoplasma Samples of Different Concentrations
Table1. Types of Mycoplasma Detectable by Arcegen One-Step Isothermal Mycoplasma Detection Kit
[Note]The blue portion indicates the same mycoplasma species detectable by both the one-step isothermal detection and PCR detection methods.
2. DfCell Mycoplasma Removal Reagent (1000×) DfCell支原體去除試劑
DfCell支原體清除試劑(1000×)是一種混合制劑，通過抑制DNA和支原體生長所需蛋白質(zhì)的合成來實(shí)現(xiàn)有效的支原體清除，而不會(huì)對(duì)細(xì)胞造成傷害。它旨在最大程度地拯救您的細(xì)胞，并將支原體污染造成的損失降至最低。
Figure 6. Demonstration of Cell Removal Effectiveness
- 支原體去除試劑產(chǎn)品優(yōu)勢：
低毒性：對(duì)細(xì)胞的毒性最小，不影響隨后的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，如細(xì)胞活力測定和細(xì)胞轉(zhuǎn)染。
穩(wěn)定性強(qiáng)：試劑可在-20°C下長時(shí)間儲(chǔ)存，同時(shí)保持高效。
操作簡單：只需將產(chǎn)品加入被支原體污染的培養(yǎng)基中，孵育即可。
快速作用：“立即生效”，在短短3天內(nèi)就能看到效果。
去除范圍廣：能夠去除實(shí)驗(yàn)室常見的大多數(shù)支原體類型。
Figure 7. Illustration of Cell Toxicity Detection of DfCell Mycoplasma Removal Reagent
3.預(yù)防支原體污染
常見問題
問:如何檢測新鮮培養(yǎng)基是否被支原體污染？
答:將新鮮培養(yǎng)基在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)(樣本)，然后收集一定量的上清液用于測試。如果樣本變成天藍(lán)色或顯示PCR擴(kuò)增帶，則表明支原體污染。
問:為什么同一樣本在一步恒溫檢測試劑盒中結(jié)果顯示為陽性，而在PCR檢測中卻為陰性？
答:一步恒溫檢測試劑盒檢測27種支原體，而PCR檢測只檢測12種常見類型。樣本中的支原體污染可能不包括在PCR檢測的種類中。
問:為什么對(duì)于同一份樣本，PCR結(jié)果顯示為陽性，而一步恒溫檢測試劑盒結(jié)果為陰性？
答:PCR的靈敏度高于一步恒溫法，因?yàn)樗梢詸z測單個(gè)拷貝的支原體，而一步法需要103個(gè)拷貝。
問:巢式PCR和一步恒溫檢測試劑盒哪個(gè)更好？
答:客戶可以根據(jù)他們的實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的產(chǎn)品，或者他們可以結(jié)合使用這兩種方法來識(shí)別支原體污染。
產(chǎn)品推薦
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Product Name |
Catalog Number |
Specifications |
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C230106E |
25 T |
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C230106S |
100 T |
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C230105S |
25 T |
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C230105M |
100 T |
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C230101E |
500 mL |
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C230101S |
2×500 mL |
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C230101M |
10×500 mL |
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C230102E |
100 uL |
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C230102S |
1 mL |
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C230102M |
5×1 mL |