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細胞骨架是一種網狀的纖維結構，高度動態(tài)，在不同階段呈現不同形態(tài)。它主要由微絲、微管和中間絲組成。微絲主要由肌動蛋白構成，肌動蛋白有兩種形式：單體的球狀肌動蛋白（G-actin）和多聚體的纖維狀肌動蛋白（F-actin）。微絲的組裝涉及G-actin向F-actin的轉化。

鬼筆環(huán)肽是一種雙環(huán)七肽，是最早發(fā)現的環(huán)肽之一，從毒鵝膏（Amanita phalloides）中分離出來。它通過結合并穩(wěn)定纖維狀肌動蛋白（F-actin）發(fā)揮作用，并有效防止肌動蛋白纖維的解聚。由于鬼筆環(huán)肽與F-actin的緊密結合和選擇性，它能夠揭示細胞內微絲骨架的分布。因此，含有鬼筆環(huán)肽的熒光標記已廣泛用于生物顯微鏡技術中。

Arcegen Biological提供的鬼筆環(huán)肽產品種類繁多，主要根據使用的不同的熒光團進行區(qū)分，從而在激發(fā)時產生不同的熒光顏色。這有助于在選擇適當的設備時滿足激發(fā)和發(fā)射波長的要求，從而在共染色時區(qū)分其他熒光染料的熒光顏色。
 

實驗程序

鬼筆環(huán)肽的準備
 

將0.1毫克的鬼筆環(huán)肽溶解在1毫升的無水甲醇中（也可以使用DMSO或無水乙醇溶解），以制備母液，該母液可以在黑暗中長期存放在-20°C的環(huán)境中。工作液濃度為5微克/毫升，是從母液中用PBS稀釋20倍得到的。

染色程序

將細胞用PBS緩沖液沖洗兩次，每次10分鐘。用3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定細胞20分鐘，然后用PBS緩沖液沖洗細胞兩次。加入5微克/毫升的FITC標記鬼筆環(huán)肽，在室溫下進行染色30-60分鐘（夏季時間更短）。用PBS緩沖液沖洗細胞兩次。用DAPI或Hoechst33258染色細胞核10分鐘，然后用PBS緩沖液沖洗細胞兩次。去除多余的水分，加入熒光封片液（中性或微堿性緩沖液與等量的甘油混合），蓋上蓋玻片，在熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察。

客戶案例

客戶來源：四川大學華西口腔醫(yī)學院

細胞類型：骨髓間充質干細胞

比例尺：100微米

參考文獻：Zhu Z, Jiang S, Liu Y, 等. 微米或納米：不同粒徑鎂金屬有機框架-74的生物安全性和生物效能評估。納米研究，2020, 13(2):511-526.

產品介紹：使用的染色產品是FITC標記的鬼筆環(huán)肽，它呈現綠色熒光。該圖像是通過MTT實驗以及FITC標記的鬼筆環(huán)肽和DAPI染色獲得的，用以確定Mg-MOF74對骨髓間充質干細胞（BMSCs）的安全劑量，確保后續(xù)實驗在安全劑量范圍內進行。
 

細胞類型：骨髓間充質干細胞

比例尺：50微米

參考文獻：Fan Z, Xiao L, Lu G, Ding Z, Lu Q. 水溶液中不溶性無定形絲素蛋白支架。生物醫(yī)學材料研究B應用生物材料。2020;108(3):798-808. doi:10.1002/jbm.b.34434

產品介紹：使用的染色產品是羅丹明標記的鬼筆環(huán)肽，它呈現紅色熒光。圖像顯示了羅丹明標記的鬼筆環(huán)肽染色和DAPI核染色，觀察了骨髓間充質干細胞在不同再生絲素蛋白支架上分化為內皮細胞的情況，使用共聚焦顯微鏡進行觀察。

結論

熒光和生物素標記的鬼筆環(huán)肽衍生物與肌動蛋白抗體相比具有顯著優(yōu)勢。鬼筆環(huán)肽衍生物的結合在不同物種（包括動物和植物）之間保持一致，并且不會因肌動蛋白的變化而受到顯著影響。此外，它們的非特異性染色可以忽略不計，因此在染色和未染色區(qū)域之間形成了高對比度。

注意事項

1. 鬼筆環(huán)肽具有低分子量，能夠輕松穿透細胞，無需預先用冷丙酮或TRITON X-100處理。

2. 它們具有高毒性；因此，在操作時請戴上手套。

產品特點

1. 高親和力：解離常數Kd為20納摩爾（nM）。

2. 強特異性：選擇性地結合纖維狀肌動蛋白（F-actin），而不結合單體的球狀肌動蛋白（G-actin）。

3. 優(yōu)于抗體染色：鬼筆環(huán)肽不受物種限制，并且表現出極小的非特異性染色，使得染色區(qū)域和未染色區(qū)域之間的對比度非常清晰。

4. 高靈敏度：在納摩爾濃度（nM）下的染色滿足實驗要求。

5. 良好的兼容性和肌動蛋白活性保持：鬼筆環(huán)肽衍生物體積小，直徑約為12-15埃（Å），分子量小于2000道爾頓（Da），這使得標記的肌動蛋白的許多生理特性得以保持。

6. 廣泛的適用性：沒有物種特異性；同樣適用于甲醛固定的和穿孔的組織樣本。
 

常見問題解答

Q1: 可以在活細胞中進行鬼筆環(huán)肽染色嗎？
A: 鬼筆環(huán)肽染色需要對樣本進行固定和通透化處理，以促進鬼筆環(huán)肽與F-actin之間的結合，從而獲得更好的染色效果。

Q2: 我的細胞樣本已經轉染了帶有GFP標簽的質粒。我應該選擇哪種鬼筆環(huán)肽？
A: 你可以選擇用TRITC（橙色）、iFluorTM 555（橙色）或iFluorTM 647（遠紅）標記的鬼筆環(huán)肽。

Q3: 染色貼壁細胞需要多少工作液？
A: 染色貼壁細胞只需要足夠的工作液來完全覆蓋細胞。

Q4: 不同的鬼筆環(huán)肽有什么區(qū)別，我該如何選擇？
A: 區(qū)別在于用于標記的熒光團，它們在激發(fā)時會產生不同的熒光顏色。這有助于在共染色時區(qū)分其他熒光染料的熒光顏色。選擇時應基于機器對激發(fā)和發(fā)射波長的要求。

Q5: 鬼筆環(huán)肽染色有物種特異性嗎？
A: 在染色活體動物細胞時沒有物種特異性。

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