細(xì)胞示蹤技術(shù)對(duì)于研究細(xì)胞的起源,了解組織器官發(fā)育及探究疾病的發(fā)生機(jī)制等都至關(guān)重要。細(xì)胞示蹤技術(shù)最早起源于20世紀(jì)初期,經(jīng)過(guò)研究者多年努力,現(xiàn)在通過(guò)不同的標(biāo)記物和不同的成像手段對(duì)細(xì)胞活動(dòng)進(jìn)行觀察。
根據(jù)標(biāo)記物的的種類可以分為外源性標(biāo)記物和內(nèi)源性標(biāo)記物。外源性標(biāo)記物通常按照簡(jiǎn)單的孵化而導(dǎo)入細(xì)胞,包括:熒光染料成像和量子點(diǎn)成像在示蹤標(biāo)記物的應(yīng)用方面,內(nèi)源性遺傳標(biāo)記發(fā)生于基因水平,能夠克服傳統(tǒng)標(biāo)記物的局限和缺點(diǎn)。在追蹤手段上,借助光學(xué)顯微鏡,可在活體內(nèi)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行追蹤和觀察。內(nèi)源性標(biāo)記物通常是具有生物活性的蛋白質(zhì),主要包括熒光素酶、熒光蛋白及β-半乳糖苷酶。
熒光素酶基因?qū)爰?xì)胞后,能表達(dá)熒光素酶,通過(guò)注射底物就可以觀察被標(biāo)記細(xì)胞的發(fā)光現(xiàn)象,實(shí)現(xiàn)細(xì)胞示蹤。熒光蛋白由于熒光信號(hào)強(qiáng),便于觀察追蹤,已經(jīng)廣泛用于細(xì)胞示蹤研究。內(nèi)源性標(biāo)記的活體示蹤相比外源性標(biāo)記示蹤更能闡明細(xì)胞在體內(nèi)真實(shí)的分化發(fā)育及遷移情況。與熒光素酶放光方式不同,熒光蛋白發(fā)光不需要注射底物,其發(fā)光原理是較高能量的激發(fā)光能使其蛋白構(gòu)象發(fā)生改變而產(chǎn)生熒光。最常見的熒光蛋白有綠色熒光蛋白和紅色熒光蛋白。
以上內(nèi)源性標(biāo)記物與傳統(tǒng)的細(xì)胞標(biāo)記物最大的區(qū)別在于它不會(huì)向臨近細(xì)胞污染擴(kuò)散,能夠穩(wěn)定的表達(dá),并且隨著細(xì)胞的分裂,標(biāo)記也會(huì)遺傳給子代細(xì)胞。運(yùn)用病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)是將外源基因整合入目的細(xì)胞是一種普遍使用的方式。
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不同的標(biāo)記適用的實(shí)驗(yàn)
LUC常用于細(xì)胞標(biāo)記后小動(dòng)物細(xì)胞移植活體成像追蹤,從而評(píng)估移植后細(xì)胞的歸巢以及治療效果等。
GFP,RFP能穩(wěn)定在后代遺傳,它在定量或其他實(shí)驗(yàn)中慢慢取代了傳統(tǒng)的化學(xué)染料。更多地,熒光蛋白被改造成了不同的新工具,廣泛被用于超分辨顯微鏡成像。

