PCR-based Genotyping等實(shí)驗(yàn)，常需純化樣本基因組。當(dāng)待測樣本較多時(shí)，純化基因組的過程費(fèi)時(shí)、操作重復(fù)，并且實(shí)驗(yàn)成本高。
直擴(kuò)PCR直接從樣本開始，以未經(jīng)基因組純化的微量原始樣本或其裂解產(chǎn)物作為模板，進(jìn)行PCR-based Genotyping。與常規(guī)PCR-based Genotyping相比，直擴(kuò)樣本用量少，操作簡單，實(shí)驗(yàn)成本低，可高通量化樣本檢測。
圖. Direct PCR技術(shù)
A. 直接法：取少量樣本直接加入到PCR Master Mix中，進(jìn)行PCR鑒定。
B. 裂解法：樣本取樣后，加入裂解液中，裂解釋放基因組，取少量裂解上清液加入到PCR Master Mix中，進(jìn)行PCR鑒定。
技術(shù)優(yōu)勢
♦ 直接：無需進(jìn)行費(fèi)時(shí)而昂貴的DNA純化
♦ 快速：10min完成模板制備，最少50min完成PCR反應(yīng)
♦ 簡便：樣品無需剪碎或研磨即可完成裂解;PCR Mix為預(yù)混液形式，減少加樣步驟
♦ 節(jié)省：材料用量少
♦ 高通量：可在96孔板中完成裂解反應(yīng)
直擴(kuò)PCR試劑盒類型
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產(chǎn)品參數(shù) |
小鼠組織直擴(kuò)試劑盒 |
血液直擴(kuò)試劑盒 |
植物組織直擴(kuò)試劑盒 |
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適用生物 |
小鼠、大鼠 |
廣泛生物 |
水稻、玉米、煙草、油菜、小麥、大豆等 |
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適用組織/材料類型 |
鼠尾、鼠耳、腳趾（帶肌肉）和其他臟器 |
含常規(guī)抗凝劑的新鮮血液、冷藏（凍）血液及Whatman903®和FTA®商用干血漬 |
嫩葉、老葉、幼苗、嫩莖 |
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樣品使用量 |
組織：5-10mg，鼠尾：1-5mm |
最佳全血模板體積濃度范圍為0.5%-20%，推薦使用量為10%作為初始嘗試條件。對(duì)于貯存在Whatman®濾紙卡上的干血漬，則可取約1 mm2帶血漬的圓紙片 |
葉片：1-10mm，種子：1-3mm |
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基因組釋放時(shí)間 |
15min |
無需 |
0-10min |
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PCR產(chǎn)物最適長度 |
＜1kb |
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PCR產(chǎn)物是否加A |
是，但裂解反應(yīng)體系加A效率不定 |
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20µL體系，裂解產(chǎn)物使用量 |
0.2-2µL |
無需裂解 |
0.2-1µL |
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應(yīng)用 |
轉(zhuǎn)基因鑒定、基因分型等 |
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實(shí)驗(yàn)過程
本系列產(chǎn)品運(yùn)用獨(dú)特的蛋白酶裂解體系，裂解樣品，裂解液可直接作為模板，搭配試劑盒中的PCR Master Mix進(jìn)行基因擴(kuò)增。
圖. 小鼠組織直擴(kuò)PCR實(shí)驗(yàn)過程
圖. 植物組織直擴(kuò)PCR實(shí)驗(yàn)過程
產(chǎn)品性能
1、基因敲除小鼠基因型鑒定
圖. 小鼠直擴(kuò)PCR試劑盒檢測基因敲除直擴(kuò)結(jié)果
M：100bp DNA ladder。1-8：以裂解產(chǎn)物為模板。+：以50ng純化基因組DNA為模板。﹣：以去離子水為模板。循環(huán)數(shù)：35個(gè)循環(huán)。
單條帶（580bp）：敲除動(dòng)物純合子基因組。單條帶（180bp）：野生型基因組。兩條帶（580bp/180bp）：敲除動(dòng)物雜合子基因組。
2、小鼠基因釋放更快速、更充分
圖. 小鼠組織直擴(kuò)PCR試劑盒不同裂解時(shí)間直擴(kuò)結(jié)果
M：100bp DNA ladder。+：以50 ng純化基因組DNA為模板。循環(huán)數(shù)：35個(gè)循環(huán)。
圖. 鼠尾經(jīng)不同裂解方式處理后的直擴(kuò)結(jié)果。
檢測基因：SOX21。M：100 bp DNA ladder。1-2：以常規(guī)堿裂解方式處理裂解產(chǎn)物為模板。
3-4：以小鼠組織直擴(kuò)PCR試劑盒裂解產(chǎn)物為模板。+：以50 ng純化基因組DNA為模板。﹣：以去離子水為模板。循環(huán)數(shù)：35個(gè)循環(huán)。
3、小鼠直擴(kuò)表現(xiàn)優(yōu)于競品
圖. 鼠尾經(jīng)不同品牌同類產(chǎn)品裂解處理后的直擴(kuò)結(jié)果
檢測基因：SOX21。M ：100 bp DNA ladder。+ ：以50 ng純化基因組DNA為模板。循環(huán)數(shù)：35個(gè)循環(huán)。
4、多類型植物樣本驗(yàn)證表現(xiàn)優(yōu)異
圖. 不同類型植物葉片直擴(kuò)結(jié)果
M：100 bp DNA ladder。C：相應(yīng)植物純化基因組DNA為模板。1-2：葉片組織裂解產(chǎn)物為模板。循環(huán)數(shù)：30個(gè)循環(huán)。
5、多類型血液樣本驗(yàn)證表現(xiàn)優(yōu)異
圖. 使用Positive control primer mix引物直接從不同物種、不同抗凝劑的全血及血卡中擴(kuò)增237 bp的DNA片段。
血液模板濃度為10%，血卡模板為1 mm2大小。NTC為DEPC水作為模板，PC為提取純化的人基因組DNA作為模板。1.人EDTA抗疑血(-20°C)；2.小鼠EDTA抗凝血（新鮮）；3.山羊EDTA抗凝血(-80℃)；4.人血卡；5.人肝素抗疑血(-80°C)；6.雞肝素抗凝血（新鮮）；7.豬檸檬酸鈉抗疑血(4°C)；8.NTC ；9.PC。
6、血液樣本耐受性最高可達(dá)40%
圖 含肝血抗凝血人血液直擴(kuò)2kb、71%GC目的片段結(jié)果
血液模板濃度設(shè)置0.5-50%，延伸時(shí)間10 s/kb。
圖 含EDTA抗凝血小鼠血液直擴(kuò)2.2kb、67%GC目的片段結(jié)果
血液模板濃度設(shè)置0.5-50%，延伸時(shí)間10 s/kb。
客戶反饋
1、北京客戶：小鼠基因型鑒定效果優(yōu)異
圖. 使用Arcegen小鼠直擴(kuò)PCR試劑盒進(jìn)行小鼠基因型鑒定結(jié)果
2、武漢客戶：水稻基因直擴(kuò)效果優(yōu)異
圖. 使用Arcegen植物直擴(kuò)PCR試劑盒擴(kuò)增水稻相關(guān)基因
3、上海客戶：血液直擴(kuò)PCR在競品中表現(xiàn)優(yōu)異。
圖 使用Arcegen血液直擴(kuò)PCR直接從人全血擴(kuò)增不同長度DNA片段
血樣為-20℃儲(chǔ)存的EDTA抗凝血，血液模板濃度為10%，延伸時(shí)間10 s/kb。
237 bp；2. 150 bp (30%GC)；3. 120 bp (75%GC)；4. 2.1 kb (30%GC)；5. 2 kb (71%GC)；6. 4 kb (68%GC)；7. 5 kb (65% GC)；8. 8 kb (48% GC)
產(chǎn)品訂購
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產(chǎn)品應(yīng)用 |
產(chǎn)品名稱 |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
目錄價(jià) |
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直擴(kuò)PCR，支持5重?cái)U(kuò)增，高GC兼容 |
Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye) |
N132021E |
50 T |
300.00 |
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N132021S |
200 T |
900.00 |
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N132022E |
20 T |
200.00 |
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N132022S |
100 T |
700.00 |
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N132023E |
50 T |
400.00 |
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N132023S |
200 T |
1200.00 |
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裂解液組分 |
N132028E |
50 T |
125.00 |
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N132028S |
200 T |
300.00 |
相關(guān)產(chǎn)品
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應(yīng)用類型 |
產(chǎn)品名稱 |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
目錄價(jià) |
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凝膠電泳必備款 |
N132101S |
100 g |
180.00 |
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N132101M |
500 g |
810.00 |
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無需稱量，一次一片，不用擔(dān)心瓊脂糖掛壁 |
N132103S |
1 BOX (200 TABLETS) |
1200.00 |
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替代EB的無毒染料，適用藍(lán)光及紫外光 |
N132109S |
500 μL |
580.00 |
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N132116S |
100 T |
110.00 |
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N132116M |
10×100 T |
990.00 |
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N132111S |
100 T |
110.00 |
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N1321112M |
10×100 T |
990.00 |
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N132112S |
100 T |
110.00 |
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N132112M |
10× 100 T |
990.00 |
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N132113S |
100 T |
110.00 |
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N132113M |
10×100 T |
990.00 |
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N132114S |
100 T |
110.00 |
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N132114M |
10×100 T |
990.00 |
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N132115S |
100 T |
110.00 |
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N132115M |
10×100 T |
990.00 |
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N132117S |
100 T |
110.00 |
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N132117M |
10× 100 T |
990.00 |
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N132118S |
100 T |
110.00 |
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N132118M |
10× 100 T |
990.00 |
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N132119S |
100 T |
110.00 |
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N132119M |
10×100 T |
990.00 |
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N132120S |
1 mL |
110.00 |
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N132120M |
100x1 mL |
20900.00 |
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N132121S |
100 T |
110.00 |
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N132121M |
10× 100 T |
990.00 |