人維生素D（VD）酶聯免疫分析（ELISA） 試劑盒使用說明書 本試劑僅供研究使用? ?????目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關液體樣本中維生素D（VD）的含量。 實驗原理： ? ?本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人維生素D (VD)水平。用純化的人維生素D (VD)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入維生素D (VD)，再與HRP標記的維生素D (VD)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的維生素D (VD)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人維生素D (VD)濃度。 試劑盒組成： 試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存 說明書 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 密封袋 1個 1個 酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存 標準品：1350μg/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存 酶標試劑 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 樣品稀釋液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存 濃縮洗滌液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存 樣本處理及要求： 1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。 2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。 3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。 4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。 5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。 6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融. 7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 操作步驟 1.???????? 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10<