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CAR-T細胞療法的問世，正在改寫腫瘤治療乃至自身免疫性疾病治療的版圖。然而，無論是當下成熟的ex vivo（體外）CAR-T產品，還是備受矚目的in vivo（體內）CAR-T新一代療法，一個關鍵問題始終貫穿始終：如何在患者的外周血中，精準、高效地監測CAR-T細胞的擴增動態？這不僅關乎藥物代謝動力學（PK）/藥效學（PD）評價，更直接關系到療效預測和安全性評估。

長期以來，PBMC（外周血單個核細胞）是CAR-T臨床檢測中最常用的樣本類型。然而，隨著精準醫學的深化和CAR-T療法向更多應用場景的拓展，全血檢測正憑借更強的生理相關性和操作優勢，成為補齊傳統方法“關鍵缺口”的新一代解決方案。ACROBiosystems百普賽斯在CD19 CAR檢測體系中率先開展系統性驗證：構建spike-in全血模型，并提供經過驗證的熒光標記CD19蛋白及抗FMC63抗體等工具，為行業從PBMC向全血檢測的范式轉變提供堅實的數據支撐和可靠的工具選擇。

PBMC檢測之所以能夠成為CAR-T監測的主流手段，并非偶然。一方面，PBMC可通過外周血反復采集，樣本可及性強；另一方面，結合流式細胞術與PCR類方法（qPCR/ddPCR），研究人員可以有效評估CAR-T細胞的豐度與功能，為CAR-T療法的PK/PD研究提供重要的數據支撐。

然而，隨著CAR-T療法進入更廣泛和深入的應用，PBMC監測方法的局限性逐漸顯露：

① 步驟繁瑣，存在樣本偏差風險

傳統的PBMC檢測，意味著紅細胞裂解、多輪離心、細胞重懸……這一系列復雜的樣品前處理步驟，不僅耗費大量時間，更關鍵的是，每一步都可能對細胞狀態帶來影響，甚至可能選擇性丟失部分亞型的T細胞，最終導致檢測結果無法完整體現體內的真實情況。

② 生理相關性降低

經過復雜的PBMC分離之后，細胞實際上已經脫離了原始的全血微環境。對于關注CAR-T細胞“體內”真實生物學行為的研究者來說，更多地希望能在保持其生理狀態的條件下完成檢測。

③ 無法滿足in vivo療法的動態追蹤需求

特別是隨著In Vivo CAR-T技術的快速發展，業界迫切需要一種操作更簡便、反應更靈敏、且能支持長期反復從同一患者采血的高通量監測方法。顯然，傳統PBMC方法在這一點上顯得有些捉襟見肘。

那么，如果直接在未經處理的全血中檢測CAR-T細胞，會怎樣？過去，由于全血中紅細胞和高背景干擾嚴重，這曾是行業公認的技術壁壘。但近期ACROBiosystems百普賽斯發表的數據表明，這一切正在發生改變。

研究發現，在20% CAR-T細胞spike-in的全血模型中，三種檢測試劑——包括PE標記的CD19蛋白、PE標記的抗FMC63鼠單抗及兔單抗——均能準確檢測出CAR-T細胞的陽性比例，且檢測結果與理論spike-in比例高度一致。

這標志著全血檢測不僅在定性上可行，在準確定量上也展現出良好的可行性。

相比于傳統的PBMC流程，全血檢測展現出多維度的競爭性優勢：

① 高信噪比：全血中CAR-T細胞清晰可辨

通過特異性抗體或CAR靶向抗原標記，全血中CAR陽性與陰性細胞群體清晰可分；陰性對照無非特異背景，高信噪比為準確定量提供了可靠保障。

② 無損式監測：提升數據準確性與一致性

全血檢測避免了PBMC分離步驟及其對T細胞適應性的影響。省去多步樣本處理，不僅節約了時間，更重要的是杜絕了因實驗操作差異導致的數據偏差。

③ 靈活應對多場景

無論是針對需要紅細胞裂解的樣品，還是不進行裂解直接上樣的全血樣品，檢測結果均表現出良好的一致性。這意味著這些檢測方案具有極高的普適性，能夠滿足臨床檢測、臨床前研究及藥企大樣本篩選等不同場景的實際需求。

在CAR-T療法中（包括ex vivo和in vivo），能夠快速、準確地在全血中檢測到CAR陽性細胞的比例，對于監測CAR-T細胞在體內的擴增、持續性和功能持久性至關重要。近年來，隨著流式細胞技術和多重熒光標記的飛躍發展，研究人員可以在微量全血樣本中一次性捕獲多個表型與功能維度數據。

而諸如全血檢測這類技術的突破，一方面極大地解放了實驗人員的生產力，另一方面為臨床大樣本量和高時間點的精準監測鋪平了道路。

流式細胞術是CAR-T監測的核心技術。當前，ACROBiosystems百普賽斯的全血CAR檢測方案在無需裂解紅細胞的全血模型中已證實可行。

準確檢測CAR-T細胞的陽性比例，是體內監測的基本前提。以CD19這一最廣泛應用的CAR-T靶點為例，ACROBiosystems百普賽斯通過構建20% CAR-T細胞spike-in的全血模型，系統評估了CD19蛋白（Cat. No.CD9-HP2H3）及抗FMC63抗體（Cat. No. FM3-HPY53和FM3-PFM721）在全血環境中的檢測表現。

數據顯示，通過Fc受體封閉后，無論是在未經處理的全血樣本中，還是在經過紅細胞裂解的樣本中，三種檢測試劑所測得的CAR陽性細胞比例均與理論添加比例（20%）高度吻合，未見明顯偏差或非特異性背景信號。

這一結果初步證實，在全血樣本中直接檢測CAR-T細胞是準確可行的，檢測結果能夠忠實反映樣本中的真實陽性率。

After Fc receptor blockade, whole blood only control (Figure A) and whole blood spiked with CAR-T cells (Figure B) were first stained with PE-Labeled Human CD19 (20-291) Protein, His Tag (Cat. NO. CD9-HP2H3), and then stained with 7-AAD. After 100-fold dilution, acquire data using a CytoFLEX S and then analyze the data with FlowJo. CAR-T cells were identified as PE-positive events within the live CD45+CD3+ (or CD45+) lymphocyte population. The proportion of CD45+CAR+ cells is around 20%, which is largely consistent with the theoretical spike-in value.

After Fc receptor blockade, whole blood only control (Figure A) and whole blood spiked with CAR-T cells (Figure B) were first stained with PE-Labeled Monoclonal Anti-FMC63 Antibody, Mouse IgG1 (Y45) (Site-specific conjugation) (Preservative free) (Cat. No. FM3-HPY53) , and then stained with 7-AAD. After 100-fold dilution, acquire data using a CytoFLEX S and then analyze the data with FlowJo. CAR-T cells were identified as PE-positive events within the live CD45+CD3+ (or CD45+) lymphocyte population. The proportion of CD45+CAR+ cells is around 20%, which is largely consistent with the theoretical spike-in value.

After Fc receptor blockade, whole blood only control (Figure A) and whole blood spiked with CAR-T cells (Figure B) were first stained with PE-Labeled Monoclonal Anti-FMC63 Antibody, Rabbit IgG (1G10) (Cat. NO. FM3-PFM721), and then stained with 7-AAD. After 100-fold dilution, acquire data using a CytoFLEX S and then analyze the data with FlowJo. CAR-T cells were identified as PE-positive events within the live CD45+CD3+ (or CD45+) lymphocyte population. The proportion of CD45+CAR+ cells is around 20%, which is largely consistent with the theoretical spike-in value.

隨著全血CAR-T監測方案的逐步成熟，其應用場景正在迅速鋪開。ACROBiosystems百普賽斯的驗證數據也進一步證明，基于全血的檢測平臺能夠同時支持ex vivo產品和in vivo產品的CAR陽性率評估和體內藥代監測需求。

以下兩個場景值得關注：

場景一：In Vivo CAR-T研發與療效評價

對于希望擺脫體外細胞培養、直接在體內誘導T細胞表達CAR的新興療法而言，全血檢測是目前唯一的高通量、低成本動態追蹤方案，能夠幫助決策團隊在動物模型階段快速篩選出最優in vivo遞送策略。

場景二：臨床大樣本量篩查與多中心試驗

在大規模臨床試驗中，由于不同實驗室的操作差異性極易影響PBMC檢測結果的基線一致性。而標準化的全血檢測方案則提供了統一的實驗窗口，有效降低臨床中的批間差和操作誤差。

從ex vivo（體外）到in vivo（體內），CAR-T療法的技術迭代正在重塑整個行業的檢測思維。當檢測對象從經過多步處理的PBMC走向原始狀態下的全血，我們看到的不僅是實驗流程的精簡，更是檢測數據準確性和體內生理相關性的巨大跨越。

與傳統方法相比，全血檢測的核心優勢在于——流程極簡、數據保真、體內適用——而這，正是In Vivo CAR時代最寶貴的檢測特征。ACROBiosystems百普賽斯率先在這一方向上進行系統性驗證，通過構建spike-in全血模型、提供經過驗證的CD19蛋白及抗FMC63抗體工具，為行業從PBMC向全血檢測的范式轉變提供了堅實的數據支撐和可靠的工具選擇。

可以預見，全血檢測正在成為行業新標準，助力精準CAR-T監測的高效升級。對于制藥企業、CRO和臨床研究機構而言，率先擁抱這一變革，就是在為未來更精準、更高效的CAR-T療法研發搶占先機。作為這一進程的積極推動者，ACROBiosystems百普賽斯將持續為行業提供驗證數據和創新工具，與廣大研究者共同迎接In Vivo CAR監測的新時代。

這場從PBMC到全血的無聲革命已拉開序幕，而它的最終目標，仍是讓每一款CAR-T產品都能在臨床實踐中跑得更精準。