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【蛋白研究系列專(zhuān)題】-35丨ELISA方法大全,不要說(shuō)我沒(méi)告訴你

作者:武漢金開(kāi)瑞生物工程有限公司 2017-09-21T17:04 (訪(fǎng)問(wèn)量:7963)

ELISA試劑盒種類(lèi)繁多,根據(jù)原理可大致分為間接法、夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法、捕獲包被法(也稱(chēng)為反向間接法,比較少見(jiàn))。其中各類(lèi)型試劑盒的基本原理可以參考:m.whcl.com.cn/news/showarticle.asp以下為各類(lèi)型ELISA試劑盒的抗原抗體連接順序及適用類(lèi)型:


注:
:吸附介質(zhì);/:競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系;-:結(jié)合
Ag:抗原(antigen);sAg:固相抗原;lAg:游離抗原(即待測(cè)抗原);Ag*:酶標(biāo)抗原
Ab:抗體(antibody);sAb:固相抗體;lAb:游離抗體(即待測(cè)抗體);Ab*:酶標(biāo)抗體(或酶標(biāo)二抗)
lIgM:游離IgM
被測(cè)物以紅色表示
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上面的方法涉及到的是比較簡(jiǎn)單的方式,在實(shí)際運(yùn)用中則會(huì)進(jìn)行一些改良,下面舉幾個(gè)栗子!
直接法:直接用酶標(biāo)抗體結(jié)合抗原,或者直接用酶標(biāo)抗原結(jié)合抗體。間接法:間接用酶標(biāo)二抗結(jié)合特異性識(shí)別抗原的抗體。下面的栗子幫助大家理解。
栗子1
表中列出的兩種夾心法屬于直接夾心法,間接夾心ELISA則是基于兩種不同種屬來(lái)源的抗體,與直接法相比具有更高的靈敏度,常用來(lái)檢測(cè)低豐度抗原樣本。間接夾心ELISA的抗原抗體連接順序?yàn)椋?/span>-sAb1(species 1)-lAg-Ab2(species 2)-Ab*,當(dāng)然也不一定非要不同物種的抗體,使用同一物種的抗體也可以是這樣的連接順序:-sAb Fab-lAg-lAb(same species)-anti Fc Ab*
栗子2
競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法靈活性強(qiáng),在實(shí)際應(yīng)用中衍生出了許多不同的檢測(cè)方式,除了表中列出的直接競(jìng)爭(zhēng)法,還有間接競(jìng)爭(zhēng)法、夾心競(jìng)爭(zhēng)法等,這些方法是將間接法和夾心法進(jìn)行重新組合得到的更為復(fù)雜的檢測(cè)方法。
間接競(jìng)爭(zhēng)法的抗原抗體連接順序?yàn)椋?/span>-sAg/lAg-Ab-Ab*,或者-sAg-Ab/lAb-Ab*酶標(biāo)二抗。這種方法比直接法進(jìn)一步放大信號(hào),故靈敏度更高。
夾心競(jìng)爭(zhēng)法從原理上分可以有四種,實(shí)際中運(yùn)用的多是:▌-sAb-Ag/lAg-Ab*,例如ICTP檢測(cè)試劑盒就是用這種方法開(kāi)發(fā)的。
栗子3
捕獲包被法應(yīng)用于TORCH檢測(cè)時(shí),其抗原抗體連接順序?yàn)椋?span style="background-image: initial; background-position: initial; background-size: initial; background-repeat: initial; background-attachment: initial; background-origin: initial; background-clip: initial;">▌-s anti IgM Ab-lIgM-Ag*,這樣省去了常規(guī)方法中的酶標(biāo)抗體。

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各種ELISA檢測(cè)方法各有利弊,針對(duì)不同的抗原、抗體的性質(zhì),在開(kāi)發(fā)試劑盒時(shí)需要根據(jù)各自的性質(zhì)進(jìn)行設(shè)計(jì)和不同的嘗試,最終才能得到一個(gè)性能良好的試劑盒。
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