人骨堿性磷酸酶(BALP)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱：
通用名：人骨堿性磷酸酶(BALP)酶聯免疫分析試劑盒
使用目的：
本試劑盒用于測定人血液中骨堿性磷酸酶(BALP)含量。
實驗原理
本試劑盒應用間接法測定標本中人骨堿性磷酸酶(BALP)水平。用純化的人骨堿性磷酸酶(BALP)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的骨堿性磷酸酶(BALP)標準品和未知濃度的骨堿性磷酸酶(BALP)待檢樣品，溫育后，加入生物素標記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結合，形成免疫復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的骨堿性磷酸酶(BALP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人骨堿性磷酸酶(BALP)濃度。
試劑盒組成
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1 |
20倍濃縮洗滌液 |
50ml×1瓶 |
8 |
標準品S1（16μg/L） |
0.5ml×1瓶 |
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2 |
鏈霉親和素-HRP |
6ml×1瓶 |
標準品S2（8μg/L） |
0.5ml×1瓶 | |
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3 |
酶標包被板 |
12孔×8條 |
標準品S3（4μg/L） |
0.5ml×1瓶 | |
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4 |
生物素標記的抗-IgG抗體 |
6ml×1瓶 |
標準品S4（2μg/L） |
0.5ml×1瓶 | |
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5 |
顯色劑A液 |
6ml×1瓶 |
標準品S5（1μg/L） |
0.5ml×1瓶? | |
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6 |
顯色劑B液 |
6ml×1/瓶 |
9 |
說明書 |
1份 |
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7 |
終止液 |
6ml×1瓶 |
10 |
封板膜 |
2張 |
標本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于
操作步驟
1.?????? 根, 據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
2.?????? 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品，其余各步操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。然后在標準品孔中加入標準品50μl，在樣本反應孔中加入50微升樣本，蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，
3.?????? 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4.?????? 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復4次，拍干。
5.?????? 加生物素標記的抗-IgG抗體：每孔加入生物素標記的抗-IgG抗體50μl。
6.?????? 洗滌：操作同4。
7.?????? 加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻，
8.?????? 洗滌：操作同4。
9.?????? 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，
10.?? 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.?? 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
計算
??以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或