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【抗體篇】-36丨快看!你要了解的膠體金試紙條(卡)在這

作者:武漢金開(kāi)瑞生物工程有限公司 2017-09-30T12:57 (訪(fǎng)問(wèn)量:21130)

1971FaulkTaylor首先將膠體金應(yīng)用于免疫細(xì)胞化學(xué)研究,1974Romano建立了間接免疫金染色法,從此膠體金作為新型的免疫標(biāo)記技術(shù)得到迅速發(fā)展。
由膠體金標(biāo)記技術(shù)發(fā)展起來(lái)的膠體金免疫快速診斷技術(shù)主要有兩種:快速斑點(diǎn)免疫金滲濾法和膠體金免疫層析法。后者具有操作簡(jiǎn)便(浸入液體中就行)、快速(全程5~10分鐘搞定)、無(wú)需儀器設(shè)備(結(jié)果目測(cè)就OK)、試劑穩(wěn)定、成品易于保存(保質(zhì)期1~2年)等優(yōu)點(diǎn),是科學(xué)研究和臨床診斷的有力工具。

膠體金(colloidal gold)即膠體狀態(tài)的金單質(zhì),因?yàn)槠鋯钨|(zhì)粒徑非常小可以分散于溶液中形成膠體,故名膠體金。膠體金的常規(guī)制備方法是用還原劑還原氯金酸(HAuCl4,橘黃色晶體,易潮解,氯金酸合成見(jiàn)下圖)里的金元素形成金膠體顆粒。這種膠體顆粒在堿性環(huán)境下帶上負(fù)電荷,可與蛋白質(zhì)的正電荷基團(tuán)牢固結(jié)合,對(duì)蛋白進(jìn)行標(biāo)記,用于后續(xù)的檢測(cè),如制成膠體金試紙條(卡)進(jìn)行物質(zhì)的檢測(cè)。
還原氯金酸的化合物很多,通常我們選擇檸檬酸三鈉Na3C6H5O7·2H2O)。當(dāng)用1%檸檬酸三鈉還原100 mL 0.01%金**時(shí),不同體積比可以得到不同粒徑和顏色的膠體金哦!

制備膠體金步驟簡(jiǎn)單(見(jiàn)下圖),重點(diǎn)是制備過(guò)程所用到的材料都必須是徹底清潔的。例如水至少是雙蒸水,玻璃棒、玻璃容器等要酸洗后沖洗干凈并且最好是硅化的,制備好的膠體金可以加入0.02 NaN3在潔凈玻璃容器內(nèi)長(zhǎng)期存放。

適合于膠體金試紙條(卡)的膠體金粒徑在20~40 nm之間為宜,制備的膠體金溶液呈紅色,膠體金被置于試紙條(卡)的樣品墊下游。當(dāng)液體樣品滴加后,液體溶解膠體金并帶動(dòng)其與樣品中的抗原(抗體),在**纖維素膜的毛細(xì)作用下從一端慢慢滲移到吸收墊一端,利用抗體/抗原特異性結(jié)合及膠休金的顯色(紅色)反應(yīng),可以檢測(cè)抗原/抗體存在與否。
膠體金試紙條(卡)主要分為雙抗夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法兩類(lèi),前者適合檢測(cè)大分子物質(zhì),后者適合檢測(cè)小分子物質(zhì)。兩種試紙條(卡)的原理見(jiàn)下圖:

除了這兩種常規(guī)的方法,間接法也用于膠體金試紙條(卡)的制備,其原理見(jiàn)下圖:

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