本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。
兔肽聚糖（PG）定量檢測試劑盒（ELISA）
使用說明書
????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????
【試劑盒名稱】
兔肽聚糖（PG）定量檢測試劑盒（ELISA）
【試劑盒用途】
定量檢測兔血清、血漿及相關(guān)液體樣本中肽聚糖（PG）的含量。
【檢測原理】
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將標準品、待測樣本加入到預(yù)先包被兔肽聚糖（PG）抗體的透明酶標包被板中，溫育足夠時間后，洗滌除去未結(jié)合的成分，再加入酶標工作液，溫育足夠時間后，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中兔肽聚糖（PG）濃度呈正相關(guān)，450nm波長下測定OD值，根據(jù)標準品和樣品的OD值，計算樣本中兔肽聚糖（PG）含量。
【試劑盒組成】
|
1 |
酶標包被板 |
12孔×8條 |
7 |
顯色劑A液 |
6mL |
|
2 |
標準品：32pg/mL |
0.6mL |
8 |
顯色劑B液 |
6mL |
|
3 |
20倍濃縮洗滌液 |
25mL |
9 |
終止液 |
6mL |
|
4 |
標準品稀釋液 |
6mL |
10 |
說明書 |
1份 |
|
5 |
樣本稀釋液 |
6mL |
11 |
封板膜 |
2張 |
|
6 |
酶標試劑 |
6mL |
12 |
密封袋 |
1個 |
備注：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：32、16、8、4、2、1pg/mL
【需要而未提供的試劑和器材】
1、37℃恒溫箱
2、標準規(guī)格酶標儀
3、精密移液器及一次性吸頭
4、蒸餾水
5、一次性試管
6、吸水紙
【操作步驟】
1、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加。
4<, SPAN style="FONT-SIZE: 12pt; FONT-FAMILY: 宋體; mso-bidi-font-size: 10.0pt; mso-hansi-font-family: 'Times New Roman'; mso-ascii-font-family: 'Times New Roman'">、溫育：
5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。
6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加。
7、溫育：重復(fù)4的操作。
8、洗板：重復(fù)5的操作。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，
10、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11、測定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
12、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。最終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
【樣本要求】
1、樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。
2、標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能立即試驗，可將標本放于
3、樣本應(yīng)充分離心，不得有溶血及顆粒。
【注意事項】
1、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
2、酶標包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。
4、若顯色過淺，可適當(dāng)延長底物溫育時間。
5、為避免交叉污染，標準品