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發(fā)表期刊：Cancer Cell

影響因子：44.264

發(fā)表時(shí)間：2025年6月

通訊作者：Qi-Jing Li（新加坡A*STAR)、賈罄竹&朱波（第三軍醫(yī)大學(xué)）

DOI：https://doi.org/10.1016/j.ccell.2025.03.03

研究緣起——當(dāng)骨骼成為免疫治療的“暗礁”

近幾年，免疫檢查點(diǎn)抑制劑（ICB）改寫(xiě)了多種實(shí)體瘤的生存曲線。然而在臨床門診里，醫(yī)生們很快注意到一個(gè)現(xiàn)象：一旦患者合并骨轉(zhuǎn)移，原本有效的PD-1/PD-L1抗體常常“啞火”。到底是藥物無(wú)法進(jìn)入骨組織，還是骨轉(zhuǎn)移制造了全身性的免疫抑制？這篇刊登在Cancer Cell上的最新研究給出了連貫而扎實(shí)的答案。

作者首先利用5個(gè)癌種、總計(jì)1800余例的真實(shí)世界數(shù)據(jù)證明：與沒(méi)有骨轉(zhuǎn)移的患者相比，骨轉(zhuǎn)移人群接受ICB治療時(shí)，中位無(wú)進(jìn)展生存期縮短了兩到三倍，而這一差異在化療或靶向治療隊(duì)列中并未出現(xiàn)。換言之，骨轉(zhuǎn)移對(duì)ICB療效的干擾似乎具有特異性。

研究路線——臨床發(fā)現(xiàn)如何被追蹤到分子靶點(diǎn)

為了驗(yàn)證“骨轉(zhuǎn)移產(chǎn)生遠(yuǎn)程免疫抑制”這一假設(shè)，研究團(tuán)隊(duì)建立了“皮下+骨髓內(nèi)”雙瘤小鼠模型。實(shí)驗(yàn)鼠體內(nèi)同時(shí)擁有脛骨髓內(nèi)腫瘤和皮下腫瘤，后者可以用來(lái)模擬骨外病灶。給藥階段，研究者選用了Bio X Cell的InVivoPlus anti-PD-L1（clone 10F.9G2）進(jìn)行多次腹腔注射，其低內(nèi)毒素、無(wú)疊氮的配方保證了免疫研究的可重復(fù)性。結(jié)果顯示，只要小鼠攜帶骨內(nèi)腫瘤，皮下腫瘤即刻對(duì)PD-L1抗體喪失敏感性。

到底是誰(shuí)在骨里暗中“策反”了全身免疫？血清蛋白質(zhì)組學(xué)鎖定骨橋蛋白Osteopontin（OPN）為最顯著升高的因子。進(jìn)一步的體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，腫瘤“重編程”的破骨細(xì)胞大量分泌Osteopontin。當(dāng)研究者使用Bio X Cell的中和抗體InVivoMAb anti-OPN（clone MPIIIB10）或是在破骨細(xì)胞中特異性敲除Spp1（OPN 基因）時(shí)，遠(yuǎn)端皮下腫瘤對(duì)ICB的響應(yīng)被成功恢復(fù)。與此同時(shí)，RANKL抗體（Bio X Cell InVivoMAb anti-RANKL，clone IK22/5）或臨床已上市的Denosumab同樣可以阻斷破骨細(xì)胞活化，印證了RANKL–破骨細(xì)胞–OPN這條軸線是導(dǎo)致免疫耐藥的上游事件。

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組與TCR譜系配對(duì)測(cè)序進(jìn)一步揭示機(jī)制：在高OPN環(huán)境下，維持抗腫瘤火力的TCF1? Tpex細(xì)胞出現(xiàn)銳減，并迅速滑向衰竭型Tex亞群。而當(dāng)OPN被中和或破骨細(xì)胞功能受到抑制后，Tpex庫(kù)重新充盈，PD-L1抗體的抑瘤效果同步恢復(fù)。由此，一條從骨內(nèi)腫瘤出發(fā)、經(jīng)血循環(huán)、最終影響遠(yuǎn)端腫瘤免疫微環(huán)境的信號(hào)通路被完整串聯(lián)起來(lái)。

實(shí)驗(yàn)方法——臨床數(shù)據(jù)與多維模型的“接力跑”

為了從臨床現(xiàn)象追溯到分子靶點(diǎn)，研究團(tuán)隊(duì)設(shè)計(jì)了一條環(huán)環(huán)相扣的技術(shù)路線：

1. 真實(shí)世界數(shù)據(jù)驗(yàn)證

研究者整合了肺癌、乳腺癌、前列腺癌、腎癌和黑色素瘤5個(gè)ICB隊(duì)列（共1800余例），比較骨轉(zhuǎn)移與非骨轉(zhuǎn)移患者的無(wú)進(jìn)展生存期（PFS）與客觀緩解率（ORR）。同時(shí)，選取匹配人群接受化療或靶向治療作為對(duì)照，以排除治療方式本身造成的偏差。

2. 動(dòng)物模型構(gòu)建

在C57BL/6小鼠體內(nèi)同時(shí)植入脛骨髓內(nèi)腫瘤與皮下腫瘤，模擬“骨內(nèi)＋骨外”雙灶。PD-L1功能阻斷使用Bio X Cell的InVivoPlus anti-PD-L1（clone 10F.9G2），每周腹腔注射。為了追蹤骨轉(zhuǎn)移對(duì)遠(yuǎn)端腫瘤的影響，小鼠接受連續(xù)活體熒光成像與體積測(cè)量。

3. 血清蛋白質(zhì)組與因子篩選

在動(dòng)物模型及患者血樣中進(jìn)行無(wú)標(biāo)記質(zhì)譜，用火山圖篩選顯著上調(diào)蛋白。Osteopontin以最高倍數(shù)差異入選候選靶點(diǎn)。隨后，研究者建立體外破骨細(xì)胞分化體系，采用腫瘤條件培養(yǎng)基刺激，實(shí)時(shí)定量PCR與ELISA 雙管齊下測(cè)定Spp1表達(dá)。

4. 功能與因果驗(yàn)證

為確認(rèn)OPN的必要性和充分性，團(tuán)隊(duì)采用兩條平行策略：

中和抗體：使用Bio X Cell InVivoMAb anti-OPN（clone MPIIIB10）在腫瘤負(fù)荷小鼠體內(nèi)持續(xù)給藥；

條件敲除：構(gòu)建Ctsk-Cre::Spp1^fl/fl小鼠，特異性剔除破骨細(xì)胞中的OPN。此外，為阻斷破骨細(xì)胞活化，上游采用了Bio X Cell InVivoMAb anti-RANKL（clone IK22/5）及臨床等價(jià)物Denosumab。各干預(yù)組均在ICB基礎(chǔ)上聯(lián)合給藥，以評(píng)估療效恢復(fù)幅度。

5. 單細(xì)胞組學(xué)與 TCR 追蹤

腫瘤組織進(jìn)行scRNA-seq與scTCR-seq。研究者聚焦TCF1?的“先導(dǎo)耗竭型”CD8? Tpex細(xì)胞，對(duì)比干預(yù)前后細(xì)胞譜系轉(zhuǎn)化與克隆擴(kuò)增，并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)與免疫熒光驗(yàn)證IFN-γ、TNF-α等效應(yīng)因子表達(dá)水平。

6. 回顧性聯(lián)合治療評(píng)估

最后，作者回溯150例接受Denosumab+ICB的骨轉(zhuǎn)移患者，對(duì)比雙膦酸鹽+ICB組的影像學(xué)緩解及PFS，同時(shí)監(jiān)測(cè)血清OPN動(dòng)態(tài)，驗(yàn)證動(dòng)物數(shù)據(jù)在真實(shí)世界中的可遷移性。

研究結(jié)論——一條可被“截?cái)?rdquo;的遠(yuǎn)程免疫剎車

綜合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、單細(xì)胞組學(xué)以及回顧性臨床分析，論文得出了三點(diǎn)關(guān)鍵結(jié)論：

1. 骨轉(zhuǎn)移會(huì)系統(tǒng)性削弱ICB療效，其機(jī)制并非藥物分布受限，而是免疫學(xué)層面的遠(yuǎn)程抑制。

2. 破骨細(xì)胞分泌的Osteopontin是核心介質(zhì)。一旦阻斷OPN或阻斷RANKL激活鏈條，全身范圍內(nèi)的ICB耐藥即可被逆轉(zhuǎn)。

3. 循環(huán)OPN可作為預(yù)測(cè)ICB療效的生物標(biāo)志物。在真實(shí)世界隊(duì)列中，血清OPN水平越高，患者對(duì)ICB的客觀緩解率越低；而Denosumab降低OPN后，患者預(yù)后得到顯著改善

研究意義——從骨髓生態(tài)學(xué)到聯(lián)合療法新思路

這項(xiàng)工作把骨骼從傳統(tǒng)意義上的“轉(zhuǎn)移靶器官”上升為“全身免疫調(diào)控樞紐”。它提示我們，治療晚期癌癥時(shí)若忽視骨—免疫—腫瘤的三邊互動(dòng)，可能低估了耐藥的復(fù)雜性。更重要的是，本研究給出了一種可執(zhí)行的解題策略：利用Denosumab或針對(duì)OPN/RANKL的中和抗體與PD-1/PD-L1抗體聯(lián)合，有望讓骨轉(zhuǎn)移患者迎來(lái)第二次治愈機(jī)會(huì)。隨著多中心前瞻性試驗(yàn)的推進(jìn)，OPN或?qū)⒊蔀榕R床上“既是靶點(diǎn)，也是標(biāo)志物”的雙重角色分子。

Bio X Cell體內(nèi)級(jí)抗體的科研價(jià)值

從PD-L1功能驗(yàn)證，到RANKL阻斷，再到OPN因果性測(cè)試，Bio X Cell三支抗體貫穿了整條證據(jù)鏈。超低內(nèi)毒素、無(wú)疊氮的即用型制劑不僅保證了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的安全性和一致性，也讓來(lái)自不同實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)可以無(wú)縫對(duì)接。難怪PD-L1 clone 10F.9G2一支抗體就在PubMed被引用超過(guò)一千次；而RANKL與OPN抗體的應(yīng)用也正迅速擴(kuò)散到骨—免疫交叉研究的更多新靶點(diǎn)。對(duì)想要深耕免疫耐藥機(jī)制、并尋求快速驗(yàn)證假說(shuō)的科研團(tuán)隊(duì)而言，Bio X Cell或?qū)⒊蔀椴豢苫蛉钡?ldquo;實(shí)驗(yàn)語(yǔ)言”。

Bio X Cell，賦能每一次科學(xué)探索。