Lymphoprep™-即用型PBMC分離液
? Lymphoprep™是什么？
1968 年，Arne Bøyum 博士發(fā)明了一種從人體血液中分離單核細(xì)胞的簡(jiǎn)單有效的方法1。這是一種簡(jiǎn)單快速的離心方法，利用不同細(xì)胞及密度梯度離心液之間密度的差異來分離細(xì)胞：?jiǎn)蝹€(gè)核細(xì)胞(單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞)的浮力密度比紅細(xì)胞和多形核白細(xì)胞(PMN)低。絕大多數(shù)單個(gè)核細(xì)胞的密度低于1.077克/毫升。因此，可以通過在密度為1.077 g/ml的等滲分離液中離心來分離這些細(xì)胞，紅細(xì)胞和PMN可以通過分離液沉淀，同時(shí)將單個(gè)核細(xì)胞保留在樣品/分離液界面。
Lymphoprep™正是基于此方法而開發(fā)的即用型單個(gè)核細(xì)胞分離液，可用于從外周血、臍帶血和骨髓中分離單個(gè)核細(xì)胞，有超過45年的歷史，被廣泛用于文獻(xiàn)中。作為一種高效的密度梯度離心液，Lymphoprep™與Ficoll-Paque™具有相同的密度 (如下表所示)、相似的成分，并且分離所得的細(xì)胞類型和數(shù)量幾乎相同2。目前使用Ficoll-Paque™的實(shí)驗(yàn)室無需改變實(shí)驗(yàn)流程，可直接進(jìn)行替換，性價(jià)比更高。
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FICOLL-PAQUE™ PLUS |
FICOLL-PAQUE™ PREMIUM |
Lymphoprep™ |
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主要成分 |
Ficoll™ PM400(蔗糖聚合物)泛影酸鈉 |
Ficoll™ PM400(蔗糖聚合物) 泛影酸鈉 |
多聚糖 泛影酸鈉 |
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密度 |
1.077 ± 0.001 g/mL |
1.077 ± 0.001 g/mL |
1.077±0.001 g/mL |
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是否即用型 |
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是否無菌 |
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是的檢測(cè)內(nèi)毒素 |
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質(zhì)量控制體系 |
× |
ISO 13485 |
GMP標(biāo)準(zhǔn)+ ISO13485 |
? Lymphoprep™如何使用？
1. 將血液收集到含有抗凝血?jiǎng)?EDTA、肝素、ACD)的試管中，或使用去除纖維蛋白的血液。
2. 通過添加等體積的0.9% 的NaCl溶液來稀釋血液。
3. 在15ml離心管中，小心地將6 ml稀釋后的血液置于3 ml Lymphoprep上。避免混合血液和分離液。蓋上離心管蓋以防止氣溶膠的形成。
4. 在外擺式轉(zhuǎn)子中，在室溫(約20°C)下以800 x g的速度離心20分鐘。如果血液已存放超過2小時(shí)，將離心時(shí)間增加到30分鐘。
5. 離心后，單核細(xì)胞在樣品/分離液界面形成明顯的條帶，如圖所示。最好使用移液管從界面吸取細(xì)胞，而不移除上層。
6. 用0.9% 的NaCl溶液或培養(yǎng)基稀釋收獲的細(xì)胞以降低溶液的密度，并通過在250×g離心10分鐘沉淀細(xì)胞。
注意事項(xiàng)：
為了獲得最大產(chǎn)率，在分離之前，用生理鹽水以1:1的比例稀釋血樣很重要。
單個(gè)核細(xì)胞懸浮液中紅細(xì)胞的污染通常占細(xì)胞總數(shù)的3-10 %。
在強(qiáng)化免疫抑制治療期間，一些未成熟的PMN可能會(huì)與淋巴細(xì)胞結(jié)合。
使用肝素抗凝的血液時(shí)，必須除去大部分血小板，以避免在細(xì)胞毒性試驗(yàn)中受到抑制。
Lymphoprep™訂購信息：
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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AXS-1114544 |
Lymphoprep™ |
1*250ml |
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AXS-1114545 |
Lymphoprep™ |
4*250ml |
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AXS-1115757 |
Lymphoprep™ |
20*250ml |
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AXS-1114546 |
Lymphoprep™ |
1*500ml |
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AXS-1114547 |
Lymphoprep™ |
6*500ml |
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AXS-1115758 |
Lymphoprep™ |
12*500ml |
Serumwerk Bernburg AG其他相關(guān)產(chǎn)品：
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產(chǎn)品 |
描述 |
貨號(hào) |
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Lymphoprep™ Tube |
預(yù)裝有Lymphoprep™的離心管;符合GMP并通過ISO 13485認(rèn)證 Lymphoprep Tube是一種無菌管，其中Lymphoprep位于塑料濾片下方。可將稀釋的血液簡(jiǎn)單 直接地加入離心管中，濾片可防止樣本與分離液的混合。 |
AXS-1019818 AXS-1019817 |
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Nycodenz™ (iohexol powder) |
通用密度梯度分離液 Nycodenz®是一種灰白色粉末，易溶于水。可以制備密度為1.426 g/ml的高達(dá)80%(v/w)的溶液。 |
AXS-1002424 |
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OptiPrep™ (iodixanol solution) |
OptiPrep™是一款理想型密度梯度分離液 OptiPrep™是一種基于碘克沙醇的無菌的，經(jīng)過內(nèi)毒素測(cè)試的多功能分離液。 與任何其他密度梯度分離液不同，碘克沙醇(作為一種X射線成像劑)已經(jīng)過臨床測(cè)試，并嚴(yán)格 按照歐盟cGMP標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)。 |
AXS-1114542 |
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Polymorphprep™ |
即用型人多形核細(xì)胞分離液 Polymorphprep是一種即用型無菌且經(jīng)內(nèi)毒素檢測(cè)的溶液，用于分離人多形核白細(xì)胞(粒細(xì)胞)。 |
AXS-1114683 |
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Polysucrose™ 400 |
多功能非離子、親水性、水溶性粉末，可用于密度梯度分離和其他應(yīng)用 Polysucrose™ 400 是一種合成的高分子量聚合物，由蔗糖和環(huán)氧氯丙烷共聚而成。分子具有 支鏈結(jié)構(gòu)，羥基含量高，在水溶液中具有良好的溶解性。該產(chǎn)品與GE生產(chǎn)的 Ficoll® 400 相似。 |
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參考文獻(xiàn)：
Bøyum, A. (1968): Separation of leucocytes from blood and bone marrow. Scand J. Clin. Lab. Invest. 21, Suppl. 97.
Yeo C et al. (2009) : Ficoll-PaqueTM versus LymphoprepTM: a comparative study of two density gradient media for therapeutic bone marrow mononuclear cell preparations Regen Med. 4(5): 689–96
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