內(nèi)參是什么？
內(nèi)參是指在不同細(xì)胞或組織間表達(dá)相對(duì)穩(wěn)定，且具有高水平表達(dá)量的蛋白，通常在Western Blot實(shí)驗(yàn)中比較不同條件下或不同細(xì)胞組織中目標(biāo)蛋白表達(dá)量的相對(duì)多寡，因此必須先確定上樣量相同，才有比較的基礎(chǔ)。在Western Blot實(shí)驗(yàn)中，可能因總蛋白濃度測(cè)定不準(zhǔn)確，或是蛋白質(zhì)上樣時(shí)因操作產(chǎn)生誤差，所以必須設(shè)置內(nèi)部參照組來(lái)進(jìn)行校正。而這樣的參照蛋白，就稱(chēng)為內(nèi)參，對(duì)應(yīng)的抗體就稱(chēng)為內(nèi)參抗體。
內(nèi)參在Western Blot中的關(guān)鍵作用
1、用于校正蛋白水平，確保不同樣品間蛋白定量（上樣量）相同。可從條帶粗細(xì)初步判定上樣量是否有差異；然后，使用影像分析程序?qū)⒛繕?biāo)蛋白除以?xún)?nèi)參含量，所得到的數(shù)值即為校正后的目標(biāo)蛋白相對(duì)含量，以此進(jìn)行目標(biāo)蛋白相對(duì)量的比較。
2、確認(rèn)轉(zhuǎn)膜轉(zhuǎn)膜、顯色等步驟是否均勻轉(zhuǎn)移，呈色。內(nèi)參一般選用高表達(dá)的蛋白，因此可通過(guò)內(nèi)參的條帶，觀察Western Blot實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的轉(zhuǎn)膜、呈色等步驟是否有誤。
3、對(duì)文章發(fā)表絕對(duì)重要，增加實(shí)驗(yàn)可信度。
如何挑選合適的內(nèi)參抗體？
通常選擇在各細(xì)胞或組織間穩(wěn)定表達(dá)、并且不受實(shí)驗(yàn)影響的蛋白作為內(nèi)參，但不同的實(shí)驗(yàn)還是有一些細(xì)節(jié)要注意，挑選內(nèi)參可參考下面四點(diǎn)：
1、目標(biāo)蛋白的分子量。
內(nèi)參蛋白最好與目標(biāo)蛋白的分子量有5 kDa以上的差異，在Western Blot實(shí)驗(yàn)中能做區(qū)隔。分子量若太過(guò)接近，不利后續(xù)條帶的分析。例如目的蛋白分子量為34 kDa，則可考慮選擇分子量19 kDa的Cofilin 1，不宜選擇34 kDa GAPDH作為內(nèi)參。
2、研究的領(lǐng)域
挑選的內(nèi)參是否會(huì)受實(shí)驗(yàn)變化影響？例如GAPDH是常用的內(nèi)參，但在代謝糖酵解的研究中，可能就不適合做內(nèi)參；在凋亡實(shí)驗(yàn)時(shí)，TBP、Lamin A + C等與凋亡相關(guān)的因子也不適合作為內(nèi)參。內(nèi)參最好是選擇在正常狀態(tài)和病理狀態(tài)下表達(dá)沒(méi)有明顯差異的蛋白，這也是大家最容易忽略的一點(diǎn)。
3、樣本來(lái)源
a-哺乳動(dòng)物來(lái)源的組織或細(xì)胞樣本，通常選擇β-actin、GAPDH、COX4、Histone H3等。
b-其他來(lái)源樣本應(yīng)該參照文獻(xiàn)，選擇合適的蛋白作為內(nèi)參，例如植物樣本可用bata actin，Ubiquitin，Rubisco作為內(nèi)參。
4、是否使用亞細(xì)胞萃取?
一般的蛋白檢測(cè)常用β-actin、GAPDH抗體等，如針對(duì)核蛋白定量，常用的核內(nèi)參抗體有Lamin B、Histone H3、PCNA。
常用內(nèi)參的分子量和細(xì)胞定位：
為什么選擇GeneTex內(nèi)參抗體？
★ 在多個(gè)物種中驗(yàn)證
★ 適用于各種應(yīng)用
★ 在文獻(xiàn)中被廣泛引用
★ 適用于每個(gè)MW范圍的產(chǎn)品
部分暢銷(xiāo)內(nèi)參抗體：
|
貨號(hào) |
名稱(chēng) |
|
GTX628802 |
alpha Tubulin antibody [GT114] |
|
GTX109639 |
beta Actin antibody |
|
GTX629630 |
beta Actin antibody [GT5512] |
|
GTX628804 |
Cofilin 1 antibody [GT567] |
|
GTX628901 |
COX4 antibody [GT854] |
|
GTX637059 |
Hsp70 antibody [HL1580] |
|
GTX637858 |
PCNA antibody [HL1965] |
|
GTX632636 |
SDHA antibody [GT20710] |
|
GTX100118 |
GAPDH antibody |
|
GTX627408 |
GAPDH antibody [GT239] |
詳情請(qǐng)咨詢(xún) GeneTex 全國(guó)獨(dú)家代理-欣博盛生物科技
全國(guó)服務(wù)熱線: 4006-800-892 郵箱: market@neobioscience.com
深圳: 0755-26755892 北京: 010-88594029 上海: 021-34613729
廣州: 020-87615159 香港: 852-69410778
代理品牌網(wǎng)站: www.neobioscience.com
自主品牌網(wǎng)站: www.neobioscience.net