抗體可以通過(guò)不同的化學(xué)試劑交聯(lián)到酶（辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶）、熒光染料（FITC、PE、APC等）、生物素（Biotin）、膠體金等。抗體標(biāo)記HRP最為經(jīng)典的方法為NaIO4氧化法，先將HRP糖基氧化成醛基，醛基與抗體的-NH2反應(yīng)生成希夫氏堿反應(yīng)，抗體分子與HRP分子形成穩(wěn)定結(jié)構(gòu)。標(biāo)記的時(shí)候一般按照抗體分子與HRP分子摩爾比1:4的比例進(jìn)行標(biāo)記，此時(shí),兩者的質(zhì)量約為1:1。
1. 抗體/蛋白的HRP標(biāo)記（NaIO4氧化法）
標(biāo)記以2mg抗體為例。
1.1 抗體/蛋白的處理
待標(biāo)記抗體/蛋白在50mM碳酸鹽緩沖液 (0.015M Na2CO3，0.035M NaHCO3，pH9.6) 中透析，其間換液2次，抗體/蛋白濃度調(diào)整為2mg/ml；或者將高濃度的抗體用0.5M碳酸鹽緩沖液(0.15M Na2CO3,0.35M NaHCO3 ,pH9.6)稀釋到2mg/ml，如果原抗體/蛋白溶液中含有Tris、NH4+等游離氨基的試劑，必須透析除去。
1.2 HRP酶的氧化
1.2.1 稱取2mg HRP干粉(Frdbio)溶于100 μL ddH2O 中。
1.2.2 稱取 NaIO4 21mg，溶于1 mL的ddH2O中，吸取100μL NaIO4溶液與100μL的HRP溶液緩慢混合，4℃下靜置 30min，此時(shí)溶液為綠色。
（注意：此后的操作均在避光條件下進(jìn)行。）
1.2.3 吸取２μL乙二醇緩慢加入氧化后的HRP溶液，室溫避光靜置 30min，此時(shí)溶液為褐色。
1.3 抗體的標(biāo)記
1.3.1 將氧化好的HRP溶液直接加入到已處理好的抗體/蛋白溶液中，室溫反應(yīng)２h。
1.3.2 稱取0.4mg的NaBH4，溶解于20μL的 ddH2O中，全部加入上步反應(yīng)液中，4℃靜置 2h，每30min搖動(dòng)一次。
1.3.3 PBS(pH7.2)透析過(guò)夜，標(biāo)記液中加入體積比30%～50%的甘油，混勻后置于-20℃保存。
2. 抗體/蛋白的HRP標(biāo)記（戊二醛法）
參照多肽與載體偶聯(lián)相關(guān)“三種不同多肽與載體偶聯(lián)的方式——Frdbio GA(Glutaraldehyde,戊二醛)介導(dǎo)多肽與載體偶聯(lián)”。