引言
生殖器皰疹是一種由1型或2型單純皰疹病毒引起的復(fù)發(fā)性、通常疼痛的性傳播疾病。全球約有4.91億49歲以下人群感染HSV-2，并且相對(duì)于男性，女性更容易感染HSV-2。為了應(yīng)對(duì)這一疾病難題，科研界正持續(xù)探索新的防治策略。2025年3月，美國加州大學(xué)歐文分校醫(yī)學(xué)院研究團(tuán)隊(duì)聯(lián)合TechImmune, LLC公司在《Frontiers in Immunology》上發(fā)表了一篇關(guān)于在HSV-2潛伏感染豚鼠模型中，重組腺病毒疫苗rAd-RR2和rAd-gD能有效誘導(dǎo)背根神經(jīng)節(jié)與陰道黏膜中高頻率的IFN-γ+ CD4+/CD8+組織駐留記憶T細(xì)胞，顯著降低病毒脫落及生殖器皰疹病變程度，從而防止皰疹復(fù)發(fā)的研究。
用表達(dá)RR2和gD的腺病毒5型對(duì)HSV-2感染豚鼠進(jìn)行治療性免疫可預(yù)防復(fù)發(fā)性生殖器疾病
在HSV-2感染豚鼠模型中，研究團(tuán)隊(duì)比較了五種腺病毒疫苗（rAd-RR2、rAd-RR1、rAd-gD、rAd-VP22、rAd-VP16）的治療效果。結(jié)果顯示，與模擬接種組相比，所有疫苗均顯著降低累積陰道病變和復(fù)發(fā)天數(shù)，其中rAd-RR2和rAd-gD效果最優(yōu)，其DRG和VM組織中HSV-2 DNA拷貝數(shù)最低，生殖器病變?cè)u(píng)分顯著改善，保護(hù)效果與陽性對(duì)照dl529相當(dāng)。其他疫苗組呈中等保護(hù)，而模擬組無顯著保護(hù)作用。
圖1.五種基于腺病毒的候選疫苗對(duì)HSV-2感染豚鼠進(jìn)行治療性免疫后抗生殖器皰疹感染的保護(hù)效果
用rAd-RR2、rAd-RR1和rAd-gD對(duì)HSV-2感染豚鼠進(jìn)行治療性疫苗接種增加了DRG和VM中組織駐留CD4+和CD8+T細(xì)胞的頻率
在HSV-2感染豚鼠模型中，rAd-RR2、rAd-RR1和rAd-gD疫苗能顯著提升背根神經(jīng)節(jié)（DRG）中CD4+和CD8+T細(xì)胞頻率；在陰道黏膜（VM）中，rAd-RR2可顯著增加CD4+ T細(xì)胞，而rAd-RR2、rAd-VP22和rAd-VP16顯著提升CD8+T細(xì)胞。脾臟中多數(shù)疫苗組均能增強(qiáng)CD4+和CD8+T細(xì)胞應(yīng)答。結(jié)果表明rAd-RR2與rAd-gD在誘導(dǎo)局部組織駐留T細(xì)胞方面效果尤為突出。
圖2.五種基于腺病毒的候選疫苗對(duì)HSV-2感染豚鼠進(jìn)行治療性免疫后抗體的形成
用rAd-RR2、rAd-RR1和rAd-gD對(duì)HSV-2感染豚鼠進(jìn)行治療性疫苗接種增強(qiáng)了DRG和VM中的記憶T細(xì)胞
研究團(tuán)隊(duì)通過流式細(xì)胞術(shù)分析HSV-2感染豚鼠的背根神經(jīng)節(jié)和陰道黏膜組織，發(fā)現(xiàn)所有腺病毒疫苗組（rAd-RR2、rAd-RR1、rAd-gD、rAd-VP22、rAd-VP16）均能顯著提高DRG中CD4+CD44+和CD8+CD44+記憶T細(xì)胞的頻率。而在VM中，僅rAd-RR2、rAd-RR1和rAd-gD疫苗可增強(qiáng)CD8+CD44+ T細(xì)胞。CD44+T細(xì)胞的增加與疫苗誘導(dǎo)的長期適應(yīng)性免疫保護(hù)效果密切相關(guān)。
圖3.五種基于腺病毒的候選疫苗對(duì)HSV-2感染豚鼠進(jìn)行治療性免疫后，其背根神經(jīng)節(jié)和陰道黏膜中CD8+CD103+ T細(xì)胞與CD8+CRTAM T細(xì)胞頻率增加
用rAd-抗原對(duì)HSV-2感染豚鼠進(jìn)行治療性疫苗接種有效增強(qiáng)了DRG和VM中的組織駐留記憶
進(jìn)一步分析顯示，在DRG中，rAd-RR2、rAd-RR1、rAd-gD和rAd-VP22疫苗能顯著提升CD8+CD103+組織駐留記憶T細(xì)胞的頻率；但在VM中，僅rAd-RR2和rAd-gD表現(xiàn)出此效果。CD103作為駐留記憶標(biāo)志蛋白，通過結(jié)合E-鈣黏蛋白促進(jìn)T細(xì)胞在上皮內(nèi)滯留，從而在病毒再激活時(shí)觸發(fā)快速局部免疫反應(yīng)。rAd-RR2和rAd-gD誘導(dǎo)的CD103+ T細(xì)胞優(yōu)勢與其顯著降低病毒脫落和病變嚴(yán)重度的保護(hù)功效相關(guān)。
圖4.五種基于腺病毒的候選疫苗對(duì)HSV-2感染豚鼠進(jìn)行治療性免疫后，其背根神經(jīng)節(jié)和陰道黏膜中CD4+Ki-67 T細(xì)胞與CD8+Ki-67 T細(xì)胞頻率增加
本文獻(xiàn)中的研究證實(shí)，基于腺病毒載體的治療性疫苗（尤其是rAd-RR2和rAd-gD）能通過誘導(dǎo)陰道黏膜和背根神經(jīng)節(jié)中組織駐留記憶T細(xì)胞（TRM）的增殖與活化，顯著降低HSV-2潛伏感染豚鼠的病毒脫落和生殖器病變復(fù)發(fā)頻率。其保護(hù)效果與激活CD4+/CD8+ T細(xì)胞免疫應(yīng)答密切相關(guān)，且效果優(yōu)于部分傳統(tǒng)亞單位疫苗。這些發(fā)現(xiàn)為開發(fā)針對(duì)復(fù)發(fā)性生殖器皰疹的黏膜疫苗提供了關(guān)鍵理論基礎(chǔ)和候選抗原策略。除了上述對(duì)于HSV-2疫苗研究免疫機(jī)制的揭示，建立可靠的HSV-2豚鼠感染-復(fù)發(fā)模型也是轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)的關(guān)鍵橋梁。
「DIFF CRO」HSV-2豚鼠感染-復(fù)發(fā)模型
豚鼠模型在抗HSV-2病毒藥物和疫苗研發(fā)中的不可替代性：
豚鼠模型是抗HSV-2研發(fā)中不可替代的金標(biāo)準(zhǔn)，因其能完整模擬人類生殖器皰疹自然史，生殖結(jié)構(gòu)與人類高度相似：感染后可在背根神經(jīng)節(jié)建立潛伏，并自發(fā)出現(xiàn)周期性復(fù)發(fā)及無癥狀排毒。該模型提供多維量化終點(diǎn)，可同步評(píng)估藥物或疫苗對(duì)急性癥狀、復(fù)發(fā)及潛伏感染的綜合效果。但建立穩(wěn)定、可重復(fù)的豚鼠感染模型具有挑戰(zhàn)性。而構(gòu)建能再現(xiàn)自發(fā)性周期性復(fù)發(fā)的模型則更為困難，其涉及復(fù)雜的免疫與神經(jīng)調(diào)控機(jī)制，對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與長期監(jiān)測要求極高。
表1.豚鼠模型與其他模型的比較優(yōu)勢
「DIFF CRO」的HSV-2豚鼠急性感染模型評(píng)價(jià)服務(wù)
「DIFF CRO」采用豚鼠進(jìn)行HSV-2動(dòng)物攻毒可產(chǎn)生明顯的體重變化（圖5）與病變（圖6），根據(jù)實(shí)際癥狀，設(shè)置了相應(yīng)的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，具體的案例模型評(píng)分如下（圖7）：
· 1分：1-2個(gè)明顯的病變
· 2分：＞2的病變
· 3分：融合病灶
· 4分：潰瘍病變
圖5. HSV-2豚鼠攻毒體重變化（不同劑量攻毒）
圖7. HSV-2豚鼠攻毒模型案例評(píng)分
「DIFF CRO」的HSV-2豚鼠復(fù)發(fā)模型評(píng)價(jià)服務(wù)：
建立HSV-2復(fù)發(fā)模型的研究中，我司選用Hartley豚鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。通過設(shè)置不同劑量攻毒組，觀察到各組的病變表現(xiàn)及體重變化呈現(xiàn)明顯差異，體現(xiàn)了模型良好的劑量反應(yīng)關(guān)系。在為期31天的觀察期內(nèi)，已觀察到編號(hào)為2-1的豚鼠發(fā)生2次復(fù)發(fā)，進(jìn)一步驗(yàn)證了該模型可有效模擬人類HSV-2感染的復(fù)發(fā)現(xiàn)象。
圖8.基于Hartley豚鼠的HSV-2感染復(fù)發(fā)模型建立(G2攻毒組:1*10 PFU/只)
· 1分：1-2個(gè)明顯的病變
· 2分：＞2的病變
· 3分：融合病灶
· 4分：潰瘍病變
圖9.HSV-2豚鼠復(fù)發(fā)模型體重變化情況
服務(wù)內(nèi)容
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篩選項(xiàng)目 |
HSV-2豚鼠模型 |
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?臨床指標(biāo)? |
體重、存活率、病毒載量 |
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?活體成像? |
檢測病毒動(dòng)態(tài)分布 |
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?病理學(xué)? |
組織病理切片、免疫組化 |
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?免疫學(xué)? |
細(xì)胞因子檢測 |
毒株信息
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毒株類型 |
毒株名稱 |
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HSV-2 |
MS |
「DIFF CRO」HSV中和抗體檢測平臺(tái)
在體內(nèi)，中和抗體（nAb）可以通過多種機(jī)制介導(dǎo)抗病毒功能，包括中和作用和抗體效應(yīng)功能，可用于指導(dǎo)病毒疫苗設(shè)計(jì)，或作為抗病毒藥物用于預(yù)防和治療病毒性疾病中。DIFF CRO服務(wù)平臺(tái)可針對(duì)HSV疫苗及藥物進(jìn)行評(píng)價(jià)，提供基于細(xì)胞病變效應(yīng)法（Cytopathic Effect, CPE）的HSV中和抗體檢測服務(wù)（圖10）。
圖10. HSV中和抗體檢測流程圖
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「DIFF CRO」CPE法優(yōu)勢：
服務(wù)案例：
圖12.Pritelivir對(duì)HSV-1(KOS)以及HSV-2（MS）體外細(xì)胞抑制活性檢測結(jié)果
服務(wù)內(nèi)容
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項(xiàng)目 |
內(nèi)容 |
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服務(wù)名稱 |
HSV血清中和抗體檢測服務(wù) |
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樣本類型 |
血清、抗體樣本或藥篩 |
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檢測方法 |
CPE |
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質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) |
提供自研的陽性對(duì)照（單抗） |
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結(jié)果交付 |
檢測報(bào)告 |
毒株信息
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毒株類型 |
毒株名稱 |
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?HSV-1? |
F |
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HF |
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?HSV-2? |
MS |
在抗HSV藥物與疫苗的研發(fā)進(jìn)程中，臨床前模型的可靠性與預(yù)測價(jià)值至關(guān)重要。「DIFF CRO」憑借領(lǐng)先的HSV藥效評(píng)價(jià)平臺(tái)，特別是以可穩(wěn)定構(gòu)建HSV-2豚鼠感染-復(fù)發(fā)模型為核心優(yōu)勢，為創(chuàng)新療法提供關(guān)鍵支撐。我們具備行業(yè)稀缺的動(dòng)物模型能力——成功建立可模擬“急性感染-潛伏建立-自發(fā)復(fù)發(fā)”全周期的豚鼠金標(biāo)準(zhǔn)模型。依托自有毒株庫與專業(yè)團(tuán)隊(duì)，DIFF CRO致力于為全球研發(fā)者提供從體外篩選到體內(nèi)藥效驗(yàn)證的一站式CRO解決方案，顯著加速HSV藥物疫苗的臨床轉(zhuǎn)化進(jìn)程。
參考文獻(xiàn)：
Quadiri A, Prakash S, Dhanushkodi NR, et al. Therapeutic prime/pull vaccination of HSV-2-infected guinea pigs with the ribonucleotide reductase 2 (RR2) protein and CXCL11 chemokine boosts antiviral local tissue-resident and effector memory CD4+ and CD8+ T cells and protects against recurrent genital herpes. J Virol. 2024 May 14;98(5):e0159623.