PUREfrex®2.0于2015年推出，相比1.0的版本PUREfrex®2.0的蛋白產(chǎn)量有所提升。PUREfrex®2.0改進(jìn)了從大腸桿菌中純化的所有組分的制備方法，并優(yōu)化了因子的組成，實(shí)現(xiàn)了比PUREfrex 1.0高2-10倍的蛋白質(zhì)生產(chǎn)率。
圖2.PUREfrex® 1.0和PUREfrex® 2.0對比數(shù)據(jù)
PUREfrex®2.0使用方法：
以20ul反應(yīng)體系為例，如果需要擴(kuò)大體積可以等比例增加對應(yīng)試劑。
1. 在室溫或37℃下保溫1分鐘使溶液I完全融解，然后在冰上冷卻。
2. 在冰上融化溶液II和溶液III。
3. 將溶液I，溶液II和溶液III 渦旋后簡短離心收集管底內(nèi)容物。
4. 根據(jù)下列表格配置反應(yīng)液，每1kb加入模板DNA 1-3ng/ul。
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Water |
7-X μL |
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Solution I |
10μL |
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Solution II |
1μL |
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Solution III |
1μL |
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Template DNA |
X μL |
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總體積 |
20ul |
5. 在37°C的heat block或水浴中反應(yīng) 2~4 h，合成蛋白。
6. 分析合成蛋白。通過SDS-PAGE驗(yàn)證時(shí)，請用水稀釋反應(yīng)液后進(jìn)行電泳。
試劑盒組分（各組分中具體成分信息保密）：
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組分名稱 |
組分內(nèi)容 |
保存溫度 |
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Solution I |
Amino acids, NTPs, tRNAs and substrates for enzymes etc. |
-20℃ |
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Solution II |
Proteins in 30 % glycerol buffer |
-20℃/-80℃ |
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Solution III |
Ribosome (20 μM) |
-80℃ |
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DHFR DNA |
PCR product containing a gene encoding dihydrofolate reductase (DHFR) from E.coli as a positive control. (20 ng/μL) |
-20℃ |
請注意：1.在打開試劑盒之前請將試劑盒儲(chǔ)存在-80°C的溫度下。2.溶液II和溶液III避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品信息
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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GFK-PF201-0.25-EX |
PUREfrex®2.0 |
1 x 250 µl |
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GFK-PF201-2ML-EX |
2ml |
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GFK-PF201-10ML-EX |
5 x 2 ml |
當(dāng)您的蛋白質(zhì)需要分子伴侶的幫助或形成二硫鍵以形成正確的構(gòu)象時(shí)，只需向PUREfrex®2.0中添加補(bǔ)充試劑即可。
分子伴侶-幫助蛋白正確折疊，合成可溶形式蛋白質(zhì)
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產(chǎn)品貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
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GFK-PF003-0.5-EX |
DnaK Mix |
500 µl Equivalents |
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GFK-PF003-10ML-EX |
DnaK Mix |
5 x 2 ml Equivalents |
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GFK-PF004-0.5-EX |
GroE Mix |
500 µl Equivalents |
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GFK-PF004-10ML-EX |
GroE Mix |
5 x 2 ml Equivalents |
幫助形成二硫鍵的添加物
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產(chǎn)品貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
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GFK-PF005-0.5-EX |
DsbC Set |
500 µl Equivalents |
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GFK-PF005-10ML-EX |
DsbC Set |
5 x 2 ml Equivalents |
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GFK-PF006-0.5-EX |
PDI Set |
500 µl Equivalents |
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GFK-PF006-10ML-EX |
PDI Set |
5 x 2 ml Equivalents |
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