T細(xì)胞活化是適應(yīng)性免疫應(yīng)答的核心環(huán)節(jié)，其激活依賴于三個(gè)關(guān)鍵信號：T細(xì)胞受體（TCR）對抗原的識別、共刺激信號以及細(xì)胞因子信號。與這一經(jīng)典機(jī)制不同，CAR-T細(xì)胞的活化融合了天然T細(xì)胞的核心原理與人工設(shè)計(jì)的嵌合抗原受體（CAR）結(jié)構(gòu)特性，使其能夠繞過傳統(tǒng)的TCR–MHC限制，直接識別腫瘤表面抗原并高效殺傷腫瘤細(xì)胞。通過CAR的合理設(shè)計(jì)，僅依靠其胞外域與表位的識別與結(jié)合，即可實(shí)現(xiàn)CAR-T細(xì)胞的完全活化。
當(dāng)CAR特異性識別腫瘤相關(guān)表面抗原（Tumor-associated surface antigens, TAA）后，可啟動(dòng)T細(xì)胞活化程序，促進(jìn)其增殖與分化，進(jìn)而執(zhí)行關(guān)鍵效應(yīng)功能。這些功能包括釋放顆粒酶（Granzyme B）和穿孔素（Perforin），直接誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡；同時(shí)分泌干擾素-γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等細(xì)胞因子，進(jìn)一步招募其他免疫細(xì)胞并重塑腫瘤微環(huán)境。
Source: Front Immunol.
在CAR-T細(xì)胞的研發(fā)與轉(zhuǎn)化過程中，對其功能特性的評估至關(guān)重要，且標(biāo)準(zhǔn)化需求日益凸顯。目前，此類評估通常依賴于將CAR-T細(xì)胞與表達(dá)目標(biāo)抗原的細(xì)胞系共培養(yǎng)，進(jìn)而檢測其效應(yīng)功能。然而，傳統(tǒng)腫瘤細(xì)胞系存在明顯的局限性：其在處理與培養(yǎng)過程中易出現(xiàn)活力下降、代謝狀態(tài)改變或基因突變等問題，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性與可靠性。
為克服上述挑戰(zhàn)，ACROBiosystems百普賽斯依托高質(zhì)量抗原靶點(diǎn)蛋白開發(fā)平臺、磁珠技術(shù)平臺及細(xì)胞功能分析平臺，面向細(xì)胞功能研究與應(yīng)用場景，成功開發(fā)出細(xì)胞級別靶點(diǎn)蛋白和靶點(diǎn)特異性激活磁珠系列，覆蓋CD19、BCMA、CD22、Her2等多個(gè)熱門靶點(diǎn)，可有效誘導(dǎo)CAR-T細(xì)胞的特異性活化。CAR-T活化可以通過CD69和CD137表達(dá)上調(diào)進(jìn)行檢測，活化后的CAR-T細(xì)胞能夠激發(fā)包括細(xì)胞毒性活性和細(xì)胞因子釋放在內(nèi)的多種效應(yīng)功能，其反應(yīng)模式與傳統(tǒng)腫瘤細(xì)胞系所觸發(fā)的結(jié)果高度相似，為CAR-T細(xì)胞的功能表征提供了一個(gè)穩(wěn)定、可控的標(biāo)準(zhǔn)化檢測平臺。
添加小助手，了解更多產(chǎn)品及服務(wù)詳情
為評估不同刺激形式對CAR-T細(xì)胞活化的影響，我們以CD19靶點(diǎn)為例，分別采用CD19 蛋白（Cat. NO. CD9-H5251）和CD19磁珠（Cat. NO. MBS-C002）對CD19 CAR-T細(xì)胞進(jìn)行24小時(shí)與48小時(shí)的刺激。隨后分別收集細(xì)胞及上清液，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測關(guān)鍵生物標(biāo)志物的表達(dá)情況及細(xì)胞因子分泌水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，細(xì)胞級別CD19 蛋白與CD19磁珠均能有效激活CAR-T細(xì)胞，誘導(dǎo)其執(zhí)行效應(yīng)功能；但在相同蛋白量條件下，CD19磁珠表現(xiàn)出更強(qiáng)的激活能力。
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
注：為比較偶聯(lián)于磁珠的CD19蛋白（Cart. MBS-C002）與非偶聯(lián)的游離形式CD19蛋白（Cat. CD9-H5251）對CAR-T細(xì)胞的刺激效果，本實(shí)驗(yàn)基于磁珠上偶聯(lián)的CD19蛋白量，加入了等量的游離CD19蛋白作為對照。
CAR-T激活效果
CD19蛋白與CD19 磁珠均能刺激激活CAR-T細(xì)胞表達(dá)CD69和CD137。然而，在等量蛋白濃度下，CD19磁珠的激活效果更強(qiáng)。與此一致的是，經(jīng)CD19磁珠刺激的CAR-T細(xì)胞也表現(xiàn)出更高水平的LAG-3和PD-1。
-
Activation Marker
-
Exhaustive Marker
細(xì)胞因子與毒性分子表達(dá)
CD19蛋白與CD19磁珠均能模擬傳統(tǒng)腫瘤細(xì)胞，成功誘導(dǎo)CD19 CAR-T細(xì)胞產(chǎn)生多種效應(yīng)功能，包括細(xì)胞因子分泌和細(xì)胞毒性分子的表達(dá)。與上述表型活化結(jié)果一致，在等效蛋白劑量下，CD19磁珠的激活能力顯著更強(qiáng)，所誘導(dǎo)的細(xì)胞因子與細(xì)胞毒性分子水平也更高。
-
Cytokines
-
Cytotoxic Molecules
為進(jìn)一步評估磁珠物理性質(zhì)對CAR-T細(xì)胞激活的影響，我們比較了CD19磁珠（Cat. NO. MBC-C002）與CD19非磁性微珠（Cat. NO. MBS-C034）在相同實(shí)驗(yàn)條件下的激活效能。結(jié)果顯示，兩者均能有效激活CAR-T細(xì)胞，但其動(dòng)力學(xué)存在差異：在24小時(shí)的短期刺激中，磁性微珠展現(xiàn)出更強(qiáng)的激活能力；然而，當(dāng)刺激時(shí)間延長至48小時(shí)，兩種微珠的激活效果則趨于相當(dāng)。
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
CAR-T激活效果
-
Activation Marker
-
Exhaustive Marker
細(xì)胞因子與毒性分子表達(dá)
-
Cytokines
-
Cytotoxic Molecules
以上數(shù)據(jù)表明，我們的細(xì)胞級別靶點(diǎn)蛋白及磁珠/非磁性珠均可以特異性激活CAR-T細(xì)胞的基本效應(yīng)功能。該系列產(chǎn)品為建立從早期研發(fā)到臨床轉(zhuǎn)化的全流程CAR-T細(xì)胞功能評估標(biāo)準(zhǔn)化體系，提供了關(guān)鍵工具。
ACROBiosystems百普賽斯致力于為細(xì)胞治療等領(lǐng)域提供高度個(gè)性化的研發(fā)解決方案。依托ActiveMax®技術(shù)平臺，我們可為您提供專業(yè)的定制化偶聯(lián)磁珠服務(wù)，精準(zhǔn)匹配您獨(dú)特的研究需求。我們的定制服務(wù)支持開發(fā)多重抗原聯(lián)用磁珠，或攜帶特定點(diǎn)突變抗原的磁珠，以有效應(yīng)對復(fù)雜的CAR設(shè)計(jì)驗(yàn)證及腫瘤抗原逃逸等挑戰(zhàn)。此外，我們同樣提供GMP級別的定制磁珠產(chǎn)品，全面助力您的藥物從早期研發(fā)到臨床申報(bào)的全流程。
掃碼了解磁珠產(chǎn)品與服務(wù)詳情
Jogalekar MP, Rajendran RL, Khan F, Dmello C, Gangadaran P, Ahn BC. CAR T-Cell-Based gene therapy for cancers: new perspectives, challenges, and clinical developments. Front Immunol.
ACROBiosystems
inquiry@acrobiosystems.com
15117918562
（備注：姓名+公司）