中和抗體檢測(cè)——RSV疫苗評(píng)價(jià)金標(biāo)準(zhǔn)
呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus，RSV）是一種包膜單股負(fù)鏈RNA病毒， RSV可以引起全年齡段人群的呼吸道感染，是世界范圍內(nèi)引起5歲以下兒童急性下呼吸道感染（ALRTI）最常見的病毒病原，是造成嬰幼兒病毒性呼吸道感染住院的首要因素。
目前對(duì)于RSV的防治手段主要是疫苗及抗體藥物，中和抗體檢測(cè)是鑒定疫苗有效性的黃金標(biāo)準(zhǔn)，迪福潤(rùn)絲生物采用的熒光斑點(diǎn)計(jì)數(shù)法（圖1）通過(guò)DIFF-GFP熒光報(bào)告病毒檢測(cè)標(biāo)記病毒抗原的熒光抗體，可以識(shí)別早期感染和低水平的病毒復(fù)制，24小時(shí)即可得到結(jié)果，無(wú)需等待病毒大量復(fù)制引起明顯的細(xì)胞病變及合胞體影響。
圖1.熒光斑點(diǎn)計(jì)數(shù)法-RSV中和抗體檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果案例（左上角為熒光數(shù)值）
快速準(zhǔn)確的熒光斑點(diǎn)計(jì)數(shù)法
迪福潤(rùn)絲生物建立了完善的生物資源庫(kù)（Bio Database）,可提供豐富的RSV毒株進(jìn)行更加準(zhǔn)確可靠的疫苗評(píng)價(jià)。檢測(cè)用毒株包括RSV A和RSV B兩種亞型共8種毒株，其中兩株為臨床株RSV-B 9393及2444（圖2），有助于準(zhǔn)確了解藥物及疫苗對(duì)自然感染的有效性。
圖2.迪福潤(rùn)絲生物RSV臨床株進(jìn)化樹
一天出結(jié)果！RSV中和抗體檢測(cè)服務(wù)流程
迪福潤(rùn)絲生物自有的的CRO服務(wù)平臺(tái)「DIFF+」可針對(duì)RSV疫苗效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，提供基于熒光斑點(diǎn)計(jì)數(shù)法的RSV中和抗體檢測(cè)服務(wù)（圖3），該檢測(cè)方法能夠與傳統(tǒng)的PRNT檢測(cè)方法建立線性相關(guān)性，靈敏度高、檢測(cè)迅速（24h即可出結(jié)果），并且該實(shí)驗(yàn)方法的特異性、重復(fù)性均能滿足中和實(shí)驗(yàn)的要求，適用于高通量樣本的檢測(cè)。
圖3.RSV中和抗體檢測(cè)流程圖
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RSV中和抗體檢測(cè)服務(wù)案例
基于上文所示的檢測(cè)流程，通過(guò)DIFF-GFP熒光報(bào)告病毒，迪福潤(rùn)絲生物可進(jìn)行RSV疫苗中和抗體檢測(cè)及抗病毒藥物篩選等服務(wù)，24小時(shí)可快速得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。將待測(cè)樣本與RSV病毒共孵育后加入待感染細(xì)胞，CC孔為細(xì)胞對(duì)照，不加病毒，VC孔為病毒對(duì)照，只加病毒，檢測(cè)結(jié)果如圖（圖4）所示。
圖4.RSV中和抗體檢測(cè)結(jié)果案例
根據(jù)熒光斑點(diǎn)計(jì)數(shù)儀的斑點(diǎn)計(jì)數(shù)結(jié)果，半中和滴度NT50使用GraphPad Prism軟件中的非線性回歸分析計(jì)算值（圖5）。
圖5.RSV中和抗體檢測(cè)樣本1-2中和濃度曲線圖
服務(wù)內(nèi)容
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RSV真病毒血清中和抗體檢測(cè)服務(wù) |
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樣本類型 |
血清、血漿或抗體樣本 |
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檢測(cè)方法 |
熒光斑點(diǎn)計(jì)數(shù)法 |
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質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) |
提供自研的陽(yáng)性對(duì)照（單抗） |
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成果交付 |
檢測(cè)報(bào)告 |