單克隆抗體制備——融合細(xì)胞的培養(yǎng)與篩選
1. 雜交瘤融合細(xì)胞鋪板培養(yǎng)
1.1 96孔板液體培養(yǎng)
1.1.1用排槍將重懸后的細(xì)胞均勻鋪入96細(xì)胞培養(yǎng)板，200μl/孔（若飼養(yǎng)細(xì)胞已提前鋪好，則只需每孔加100μl即可）；
1.1.2鋪好后置5% CO2，37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，培養(yǎng)7天后，用HAT完全培養(yǎng)基換液一半。
1.2半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)
1.2.1 取2%甲基纖維半固體培養(yǎng)基（1×1640不完全培養(yǎng)基+1×HAT+1%雙抗+20%胎牛血清）20ml，加入20ml融合細(xì)胞和飼養(yǎng)細(xì)胞懸液（HAT完全培養(yǎng)基），再加入2ml促進(jìn)雜交瘤形成添加物因子（MAC0014），充分混勻后，倒入6孔板，3ml/孔；
1.2.2 6孔板置5% CO2，37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，長(zhǎng)出白色集落，挑取白色集落至含飼養(yǎng)細(xì)胞的96孔板中。
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貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
產(chǎn)品描述 |
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MCC0019 |
雜交瘤半固體培養(yǎng)（2%甲基纖維素） |
10ml/50ml/100ml |
細(xì)胞融合半固體培養(yǎng)或者亞克隆。 |
2. 雜交瘤陽性細(xì)胞孔的篩選
陽性細(xì)胞孔的篩選一般采用間接ELISA法。
2.1 抗原最佳包被濃度的確定
參照“多克隆抗體制備——抗體效價(jià)的檢測(cè)（ELISA）”
（在進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞檢測(cè)之前必須用陽性免疫血清建立好ELISA檢測(cè)方法。）
2.2 雜交瘤細(xì)胞孔的檢測(cè)
按照最佳包被濃度包被ELISA板，封板后，取雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)上清，加入酶標(biāo)板孔，每孔100μl；孵育洗滌后，分別加入HRP標(biāo)記羊抗小鼠，底物顯色，讀取OD值。
2.3 陽性細(xì)胞株/陽性孔的選取
選取陽性值最高的孔予以保留并進(jìn)行亞克隆。
（具體該選擇保留多少孔根據(jù)項(xiàng)目實(shí)際需求決定。