關于DIFF假病毒
假病毒（Pseudovirus）是指經(jīng)過改造后的病毒顆粒。將病毒顆粒進行人工改造，保留其部分特性的同時，成為無致病性的假病毒顆粒。在病毒性傳染病防治過程中，通過小分子、中和抗體等抑制病毒入侵細胞是關鍵的一環(huán)，假病毒在這一過程的研究中具有獨特的優(yōu)勢。
相對于“真”病毒，其安全性高，即使是高危病毒種對應的假病毒，也不需要在高生物安全等級（BSL 3/ BSL4）實驗室操作。迪福潤絲生物通過插入報告基因eGFP或Luciferase形成了H5N1高致病性禽流感的假病毒，增強了結果讀取的便捷性、客觀性，適合批量檢測。相對于ELISA等方法，假病毒更高的仿真度，可以更好地模擬感染的真實過程，增強結果可信性。
H5N1仍需持續(xù)監(jiān)測和預防
H5N1禽流感自1997年首次在香港爆發(fā)（首次發(fā)現(xiàn)H5N1感染人類）以來，發(fā)生了幾次重要的爆發(fā)事件，但尚未引發(fā)全球性大流行。2024年美國農(nóng)業(yè)部首度宣布，從堪薩斯州的兩個農(nóng)場和得克薩斯州的兩個農(nóng)場采集的奶牛樣本中（圖1），檢測出了高致病性禽流感（H5N1）陽性。隨后，美國多達九個州的奶牛群均發(fā)現(xiàn)了禽流感疫情，近期陸續(xù)已在50多種動物身上檢測到了H5N1病毒株。
圖1. 美國CDC警告得克薩斯州出現(xiàn)H5N1禽流感牛傳人事件
H5N1禽流感具有極高的高致死率，約為60%。盡管人際傳播非常有限，但一旦感染，病情可能迅速惡化，導致肺炎、呼吸衰竭和多器官衰竭。在傳播范圍上，H5N1不僅會在家禽中傳播，還能通過野生鳥類跨國傳播，對全球禽類養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失，并構成全球公共衛(wèi)生威脅。另外，H5N1病毒具有較高的突變率，其潛在的變異能力可能使其更容易在人類之間傳播，從而引發(fā)大規(guī)模流行。
DIFF H5N1假病毒應用場景
DIFF H5N1假病毒為研究H5N1禽流感病毒提供了安全、高效的體外藥物篩選平臺，H5N1假病毒技術通過模擬病毒感染早期過程，安全性好，因此被廣泛應用于抗病毒藥物的篩選中。其表面蛋白構象結構與天然H5N1病毒相似，可以模擬病毒入侵和感染的機制。DIFF H5N1假病毒技術可針對H5N1血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）蛋白靶點進行藥物有效性評價。
另一方面，DIFF H5N1假病毒還可用于評價血清樣本中H5N1禽流感病毒活性的影響及其機制（圖2），為藥物在體外對H5N1禽流感病毒活性的評價提供了新的方法（圖3）。
圖2. DIFF H5N1假病毒中和實驗結果示例
圖3. DIFF H5N1假病毒中和實驗抑制率曲線示例
對每孔計數(shù)后可計算感染抑制率，根據(jù)抑制率可作圖如下，得知1/10 陽性血
清的NT50 為1/229，故該陽性血清的NT50 為1/2290。
此外，假病毒作為ELISA試劑盒原料通常用于研究抗體反應、疫苗效果評估等。DIFF H5N1假病毒可以作為ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）試劑盒的原料，假病毒中保留的表面蛋白HA蛋白可以作為檢測抗原，用于ELISA中進行定量分析。DIFF假病毒具備良好的安全性、穩(wěn)定性和抗原表達能力，適合用于檢測工具中。
DIFF H5N1假病毒產(chǎn)品及服務信息
迪福潤絲生物自有的CRO服務平臺「DIFF+」可利用DIFF H5N1假病毒提供基于熒光斑點計數(shù)法的中和抗體檢測服務，服務流程（圖4）如下：
圖4. 中和抗體檢測流程圖
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DIFF H5N1假病毒產(chǎn)品庫：
迪福潤絲生物構建的DIFF H5N1假病毒基于2024最新從德克薩斯州農(nóng)場工人（A/Texas/37/2024）中分離出的甲型H5N1病毒，病毒HA被鑒定為分支2.3.4.4b A（H5），根據(jù)最新的研究，該病毒序列中暫時沒有發(fā)現(xiàn)與流感抗病毒耐藥性相關的標志物。
服務內(nèi)容
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DIFF H5N1假病毒血清中和抗體檢測服務 |
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樣本類型 |
血清、血漿或抗體樣本 |
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檢測方法 |
熒光斑點計數(shù)法 |
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質(zhì)控標準 |
提供自研的陽性對照（單抗） |
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成果交付 |
檢測報告 |
假病毒穩(wěn)定性驗證
DIFF H5N1假病毒穩(wěn)定性優(yōu)異，穩(wěn)定性驗證實驗（圖5、6）如下：選擇雞陽性血清進行4次重復，陰性血清進行2次重復，位于兩塊96板上，實驗每孔讀取結果和計數(shù)結果如下：
圖5、6. 穩(wěn)定性驗證（板1：B/C列為陽性血清1；D/E列為陽性血清2；F/G列為陰性血清1；板2：B/C列為陽性血清3；D/E列為陽性血清4；F/G列為陰性血清2）
圖7. 4個陽性血清樣本中和實驗抑制率曲線
結果可知，陰性血清對H5N1假病毒無中和效果，陽性血清若用Reed Muench法計算則四個重復NT50皆為1/933，陽性血清若用熒光斑點計數(shù)法得到NT50如上圖（圖7）。