小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞(BMDM)是一種通過體外誘導(dǎo)分化獲得的原代巨噬細(xì)胞模型。它是從小鼠的股骨和脛骨中提取骨髓細(xì)胞，在特定細(xì)胞因子的誘導(dǎo)下，經(jīng)過約7天的培養(yǎng)，使骨髓中的造血祖細(xì)胞增殖、分化為成熟的、具有功能的巨噬細(xì)胞。由于其易于獲取、可大量擴增、遺傳背景一致（可使用基因修飾小鼠）以及能模擬體內(nèi)巨噬細(xì)胞的關(guān)鍵特性，BMDM已成為免疫學(xué)、炎癥性疾病、感染免疫和腫瘤學(xué)等領(lǐng)域中最重要、最常用的原代細(xì)胞模型之一。
M1型和M2型是巨噬細(xì)胞在特定微環(huán)境信號誘導(dǎo)下發(fā)生的兩種主要極化（功能分化）狀態(tài)。M1型巨噬細(xì)胞的核心功能是促炎、抗腫瘤、殺傷病原體，介導(dǎo)Th1型免疫應(yīng)答。M2型的核心功能是抗炎、組織修復(fù)、促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。參與Th2型免疫應(yīng)答，抑制過度炎癥。
原代骨髓巨噬實驗最頭疼的問題： 因子配比不確定、批次差異大、分化率忽高忽低、M1/M2極化表型混亂、重復(fù)無數(shù)次仍出不了穩(wěn)定數(shù)據(jù)。為解決廣大免疫科研用戶的實驗痛點，小鼠BMDM專用細(xì)胞因子誘導(dǎo)套裝正式上新！ 標(biāo)準(zhǔn)化文獻(xiàn)配比，一套集齊分化+M1促炎極化+M2抗炎極化，全程無需自己摸索配方，輕松做出可重復(fù)、可發(fā)文的巨噬模型。
1. BMDM成熟分化系統(tǒng) M-CSF：誘導(dǎo)小鼠骨髓單核細(xì)胞定向分化為成熟、高純度靜息巨噬細(xì)胞，7天穩(wěn)定成型。
2. M1型促炎極化系統(tǒng)（經(jīng)典活化）： IFN-γ + LPS， 定向誘導(dǎo)M1巨噬，高表達(dá)促炎因子，用于急性炎癥、抗感染、抗腫瘤免疫研究。
3. M2型抗炎修復(fù)極化系統(tǒng)（替代活化）： IL-4 + IL-13 ，高效誘導(dǎo)M2巨噬，主打炎癥抑制、組織修復(fù)、纖維化、腫瘤微環(huán)境方向研究。
圖1.M1和M2型巨噬細(xì)胞的區(qū)別[1]
1. 告別配比摸索，直接上手實驗：完全參考高分文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)終濃度預(yù)配，無需自行計算、分裝、配比，大幅節(jié)省實驗摸索周期。
2. 低內(nèi)毒素、高活性、本底干凈：重組蛋白活性穩(wěn)定，無雜污染，避免巨噬細(xì)胞自發(fā)性激活，數(shù)據(jù)更可信、更適合發(fā)文。
3. 批次差異極小，重復(fù)性拉滿：解決自配試劑批次不穩(wěn)定、結(jié)果忽高忽低、實驗難以重復(fù)的常見痛點。
4. 全套實驗SOP免費附贈：骨髓提取→分化培養(yǎng)→極化加藥時序→分組設(shè)置→標(biāo)志物檢測方案，新手也能一次成功。
5. M1 / M2 明確分型，表型干凈不混雜
M1 促炎巨噬
標(biāo)志物：Nos2、TNF-α、IL-1β、IL-6、CD86
功能：急性炎癥、抗菌抗病毒、抗腫瘤免疫激活
M2 修復(fù)巨噬
標(biāo)志物：Arg1、Ym1、CD206、IL-10
功能：組織修復(fù)、抗炎、器官纖維化、腫瘤免疫逃逸
小鼠骨髓中富含造血源性懸浮干/祖細(xì)胞，M?CSF結(jié)合髓系前體細(xì)胞表面CSF?1R并激活其下游信號通路，促使骨髓髓系前體細(xì)胞定向增殖分化、逐步獲得貼壁生長特性，分化為靜息態(tài)M0型小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞（BMDM），該細(xì)胞具備巨噬細(xì)胞固有形態(tài)、表型與生物學(xué)功能。后續(xù)可通過不同細(xì)胞因子微環(huán)境調(diào)控極化方向：LPS（脂多糖）聯(lián)合IFN?γ可激活NF?κB炎性信號通路，誘導(dǎo)M0型BMDM向促炎的M1型巨噬細(xì)胞極化，高表達(dá)促炎因子與CD86等標(biāo)志物；IL?4聯(lián)合IL?13可激活JAK?STAT6信號通路，誘導(dǎo)M0型BMDM向抗炎修復(fù)的M2型巨噬細(xì)胞極化，高表達(dá)抗炎因子與CD206等標(biāo)志物。
圖2.巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)分化實驗原理
1.小鼠骨髓細(xì)胞提取
1.1.小鼠(6~8周)頸椎脫臼法處死，將處死的小鼠迅速放入含有75%酒精的小燒杯中浸泡2min。
注：BMDM受污染后，培養(yǎng)時會變得不粘附，因此暴露骨髓前應(yīng)確保乙醇徹底浸泡小鼠
1.2.在超凈臺中，手術(shù)取出所有的脛骨和股骨，并用剪刀和鑷子將骨周圍的肌肉組織盡量去除干凈；
注：BMDM接種培養(yǎng)后匯合度能達(dá)到75%，如果細(xì)胞較稀少，可能是由于切割股骨和脛骨邊緣過多導(dǎo)致收集的骨髓量不足，每次應(yīng)切割骨邊緣0.5毫米，以減少損失。
1.3.將取好的骨頭轉(zhuǎn)移到裝有無菌PBS的培養(yǎng)皿中，涮洗一次后轉(zhuǎn)移至另一個裝有無菌PBS（41403ES）的培養(yǎng)皿；
1.4.用剪刀剪去骨的兩端，再用注射器抽取PBS，針頭分別插入兩端骨髓腔中，用注射器打入PBS，反復(fù)沖洗骨髓至培養(yǎng)皿中，直至骨頭完全變白；
注：分離過程應(yīng)全程在冰上操作，保持低溫環(huán)境。
1.5.收集骨髓懸液，用70 μm篩網(wǎng)（84702ES）過濾去除小碎片和肌肉組織；將濾過液500g，5 min離心，棄去上清；
1.6.將離心后的沉淀吹散，用ACK緩沖液去除紅細(xì)胞，200g、5min離心，棄去上清。
1.7.將細(xì)胞以5×105個cells/mL接種在含有10%FBS（40132ES）、1%青霉素-鏈霉素（60162ES）和10ng/mL M-CSF（91114ES）的DMEM培養(yǎng)基（41401ES）中進(jìn)行培養(yǎng)。
2. 巨噬細(xì)胞極化誘導(dǎo)
2.1隔天半量換液，給細(xì)胞補充新鮮的含細(xì)胞因子M-CSF的培養(yǎng)基。誘導(dǎo)分化6-7天，細(xì)胞分化成M0。
注：大概3天后，骨髓細(xì)胞培養(yǎng)物開始呈現(xiàn)良好狀態(tài)，形成了分裂細(xì)胞簇，此時已經(jīng)可以觀察到最初的貼壁細(xì)胞
2.2.M1方向極化
分化6-7天后，在Mouse M-CSF存在的情況下，繼續(xù)加入100ng/ml的LPS和50ng/ml的Mouse IFN-γ，極化24-48小時。
2.3 M2方向極化
分化6-7天后，在Mouse M-CSF存在的情況下，繼續(xù)加入40ng/ml的Mouse IL-4和（或）40ng/ml的Mouse IL-13，極化24-48小時。
3.巨噬細(xì)胞鑒定
1.M0型：流式檢測，選擇F4/80+（32252ES）和CD11b+（32206ES）雙陽表達(dá)作為鑒定巨噬細(xì)胞成熟的標(biāo)志蛋白；
2.M1型：流式檢測，M1巨噬細(xì)胞上調(diào)表達(dá)CD86（771559ES）、MHCⅡ（771591ES）、CD11c（771537ES）等；
3.M2型：流式檢測，M2巨噬細(xì)胞上調(diào)表達(dá)CD206（32223ES）等。
4. 實驗案例數(shù)據(jù)
圖3.M1/M2 極化流式細(xì)胞術(shù)散點圖
（數(shù)據(jù)來源于溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院）
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產(chǎn)品分類 |
產(chǎn)品貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
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細(xì)胞因子類 |
Mouse Macrophage BMDM Cytokine Set 小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞（BMDM)誘導(dǎo)分化細(xì)胞因子套裝 |
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細(xì)胞培養(yǎng)類 |
DMEM High Glucose Medium DMEM 高糖培養(yǎng)基（含L-谷氨酰胺，丙酮酸鈉110 mg/L；不含HEPES，雙抗） |
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1× PBS 細(xì)胞培養(yǎng)級 |
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Fetal Bovine Serum Gold Pro 胎牛血清（特級） |
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Penicillin-Streptomycin (100×), Suitable for Cell culture 細(xì)胞培養(yǎng)用青霉素-鏈霉素（雙抗） |