貓傳腹的疫苗與藥物研發(fā)之路
貓傳染性腹膜炎（FIP），簡(jiǎn)稱(chēng)貓傳腹，是由貓冠狀病毒（FCoV）感染引起的傳染性疾病。FCoV感染在世界各地呈地方性流行，也是導(dǎo)致寵物貓死亡的主要原因之一。控制FCoV感染最有效的方式是疫苗接種。然而目前僅有一款活疫苗在部分國(guó)家獲批上市，即輝瑞的Felocell FIP（Primucell），新的mRNA疫苗（也稱(chēng)FCoV mRNA疫苗）當(dāng)前處于探索階段。藥物方面，目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)獲批上市的貓傳腹專(zhuān)用藥，但有部分小分子藥物被證明有不錯(cuò)的治療效果。
2017年，長(zhǎng)期研究貓傳腹的加州大學(xué)戴維斯分校教授皮特森（Niels Pedersen）發(fā)表了一篇文章，稱(chēng)一種3CL蛋白酶抑制劑（GC376）對(duì)貓傳腹有治療效果，但這種化合物的治療效果并不穩(wěn)定。2018年，皮特森發(fā)表文章稱(chēng)，441對(duì)貓傳腹有較好的治療效果。寵物圈內(nèi)的名藥441（GS-441524）是一種小分子核苷類(lèi)似物，是此前在美國(guó)獲批治療新冠的瑞德西韋的前體藥，相關(guān)專(zhuān)利掌握在美國(guó)制藥企業(yè)吉利德手中，而吉利德并未就此專(zhuān)利對(duì)外授權(quán)獸藥企業(yè)，后來(lái)只公開(kāi)了441的分子式。
CRO服務(wù)（中和抗體檢測(cè)+細(xì)胞水平篩選）
迪福潤(rùn)絲生物「DIFF+」CRO服務(wù)平臺(tái)可針對(duì)FCoV疫苗及藥物進(jìn)行有效性評(píng)價(jià)，針對(duì)FCoV的疫苗與藥物早期研發(fā)，迪福潤(rùn)絲生物可提供中和抗體檢測(cè)服務(wù)與獨(dú)家開(kāi)發(fā)的蛋白酶抑制劑篩選系統(tǒng)，幫助研發(fā)企業(yè)加速進(jìn)程，為早日實(shí)現(xiàn)合規(guī)獸藥、疫苗上市爭(zhēng)取更多時(shí)間。
FCoV（圖1）是一種有囊膜、不分節(jié)段的單股正鏈RNA病毒，屬尼多病毒目、冠狀病毒科、冠狀病毒屬，其基因組大小約為29kb。突刺蛋白（S蛋白）包含用于受體結(jié)合的亞基（S1）和介導(dǎo)膜融合亞基（S2），是產(chǎn)生中和抗體的主要蛋白，也在病毒和受體結(jié)合及入侵宿主過(guò)程中發(fā)揮重要作用。因此，編碼S蛋白及其片段的mRNA疫苗是有效預(yù)防貓傳染性腹膜炎的舉措。
圖1. FCoV病毒結(jié)構(gòu)示意圖
FCoV中和抗體檢測(cè)服務(wù)
迪福潤(rùn)絲生物提供基于CPE法的中和抗體檢測(cè)服務(wù)（圖2），該檢測(cè)方法靈敏度高、檢測(cè)迅速，并且該實(shí)驗(yàn)方法的特異性、重復(fù)性均能滿(mǎn)足中和實(shí)驗(yàn)的要求，適用于高通量樣本的檢測(cè)。
圖2. FCoV中和抗體檢測(cè)流程圖
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毒株類(lèi)型 |
毒株名稱(chēng) |
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FCoV毒株 |
FCoV-II |
WSU79-1146 |
圖3.FCoV感染CRFK細(xì)胞0-48小時(shí)CPE效應(yīng)變化圖
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FCoV血清中和抗體檢測(cè)服務(wù) |
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樣本類(lèi)型 |
血清、血漿或抗體樣本 |
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檢測(cè)方法 |
CPE法 |
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質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) |
提供自研的陽(yáng)性對(duì)照（單抗） |
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結(jié)果交付 |
檢測(cè)報(bào)告 |
FCoV細(xì)胞水平篩選（蛋白酶抑制劑篩選服務(wù)）
FCoV病毒的多聚蛋白的裂解由兩種蛋白酶調(diào)控：主要蛋白酶（3CLpro，也稱(chēng)為Mpro或nsp5）和木瓜蛋白酶樣蛋白酶（PLpro）。3CLpro在病毒生命周期中發(fā)揮的重要作用，使其成為藥物設(shè)計(jì)的一個(gè)有吸引力的重要靶點(diǎn)。迪福潤(rùn)絲生物獨(dú)家開(kāi)發(fā)的基于綠色熒光蛋白（GFP）的系統(tǒng)可進(jìn)行大量的候選化合物高通量篩選。
本系統(tǒng)是一種正向的細(xì)胞水平篩選，全真模擬病毒進(jìn)入細(xì)胞后的真實(shí)反應(yīng)，當(dāng)候選化合物對(duì)蛋白酶的抑制作用越強(qiáng)，熒光效果越明顯。本圖（圖4）展示了迪福潤(rùn)絲生物蛋白酶抑制劑篩選系統(tǒng)通過(guò)肉眼直接觀察熒光變化的能力。在溶劑對(duì)照樣本（Indicator）中，無(wú)法看到綠色熒光（僅為背景值）。當(dāng)陽(yáng)性藥物GC376的濃度為3.125μM時(shí)，肉眼可觀察到微弱的綠色熒光，表示GC376在3.125μM的濃度下，已存在針對(duì)FCoV病毒的蛋白酶抑制活性。隨著GC376濃度增加，熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，這種肉眼可見(jiàn)的熒光變化直觀地體現(xiàn)了藥物的劑量依賴(lài)性，表示GC376對(duì)FCoV蛋白酶的抑制作用存在劑量依賴(lài)性。
圖4. 使用迪福蛋白酶抑制劑篩選系統(tǒng)進(jìn)行FCoV陽(yáng)性藥物GC376篩選的熒光變化圖