抗體的標(biāo)記——FITC-文獻(xiàn)綜述-資訊-生物在線

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抗體的標(biāo)記——FITC

作者:福因德科技(武漢)有限公司 2022-06-14T00:00 (訪問(wèn)量:13554)

1. 將待標(biāo)記的抗體/蛋白(濃度≧1mg/ml)對(duì)標(biāo)記反應(yīng)液 (90mM NaHCO3,10mM Na2CO3,126mM NaCl,pH9.0) 于4℃透析三次。

2. 將FITC(Frdbio)溶于DMSO中,濃度為20mg/ml。每次交聯(lián)使用的FITC均應(yīng)新鮮配制,避光。

3. (抗體/蛋白質(zhì):FITC)=1mg:150μg的比例將FITC緩慢加入于抗體溶液中,邊加邊輕輕晃動(dòng)使其與抗體混合均勻,避光4℃反應(yīng)8h。

4. 加入5M的NH4Cl至終濃度50mM,4℃終止反應(yīng)2h。

5. 將標(biāo)記產(chǎn)物在PBS中透析4次以上,至透析液清亮。

6. 交聯(lián)物的鑒定

蛋白濃度(mg/ml)=[A280–0.31×A495]/1.4

抗體/蛋白質(zhì):FITC比例=3.1×A495/(A280–0.31×A495),該值應(yīng)介于2.5~6.5之間。

7. FITC標(biāo)記的蛋白應(yīng)置于pH7.4的磷酸鹽緩沖液中,加入0.1% NaN3、1% BSA,30%甘油,短期保存于4℃避光,長(zhǎng)期應(yīng)該-20℃避光保存。

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