TransIT-X2? DYNAMIC DELIVERY SYSTEM
高效 — — 完美的廣譜轉(zhuǎn)染試劑
實用性廣 — — 可以適合用于DNA質(zhì)粒，siRNA/miRNA以及RNP復合物
科技 — — 非脂質(zhì)體，陽離子聚合物遞送
Mirus X2轉(zhuǎn)染系統(tǒng)通過創(chuàng)新的聚合物體系有效地將DNA和RNA從核內(nèi)體遞送到細胞質(zhì)中，克服了核酸遞送的關鍵障礙。
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圖1.TransIT-X2? Dynamic Delivery System可在多種細胞類型中實現(xiàn)較高水平的基因表達
TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）和Lipofectamine?2000轉(zhuǎn)染試劑（Thermo Fisher Scientific）試劑與DNA 3:1將編碼熒光素酶的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染到41種不同的細胞類型中。使用標準熒光素酶測定法比較轉(zhuǎn)染后24小時的熒光素素酶的表達。在優(yōu)化比例下實驗結(jié)果比較表明，使用TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）在41種細胞類型中的36種細胞中的熒光素酶表達優(yōu)于或者等于競爭品牌；在17種細胞中TransIT-X2? Dynamic Delivery System是Lipofectamine?2000表達水平的2倍，具體細胞在圖中用?表示。
圖2. 使用TransIT-X2? Dynamic Delivery System細胞中GFP表達水平較高
TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）將編碼EGFP的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染到A549、CHO-K1、HepG2、LNCaP、MDCK、PC-12、原代人乳腺上皮細胞（HMEC）和原代正常人真皮成纖維細胞（NHDF）。使用4-8μl TransIT-X2?（MirusBio）遞送2μg DNA。使用Zeiss Axiovert S100在轉(zhuǎn)染后48小時拍照（32X）倒置熒光顯微鏡 *代表原代細胞。
圖3.使用TransIT-X2? Dynamic Delivery System在多個細胞系和原代細胞中的GFP轉(zhuǎn)染效率較高
使用TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）將編碼EGFP的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染到A549、CHO-K1、Hep G2、MDCK、LNCaP、PC-12、原代人乳腺上皮細胞（HMEC）和原代正常人真皮成纖維細胞（NHDF）中。使用0.2-0.4μl TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）在96孔板中進行轉(zhuǎn)染，以遞送0.1μg DNA（轉(zhuǎn)染試劑：DNA的比率2:1、3:1或4:1）。轉(zhuǎn)染48小時后，用guava? easyCyte? 5HT流式細胞儀（MilliporeSigma）對三個孔進行分析。 *代表原代細胞。
圖4. 使用TransIT-X2? Dynamic Delivery System轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA和siRNA
使用TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）將Cy?5標記的編碼核YFP質(zhì)粒DNA和Cy?3標記的siRNA轉(zhuǎn)染到HeLa細胞。使用4μL TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）在6孔板中用聚-L-賴氨酸（PLL）涂層的蓋玻片進行轉(zhuǎn)染，以遞送2μg DNA（2:1試劑：DNA比）和25 nM siRNA。使用Alexa Fluor?350 Phalloidin（Thermo Fisher Scientific）對肌動蛋白細胞骨架進行染色。在轉(zhuǎn)染后24小時使用Nikon A1R共焦顯微鏡拍攝圖像（63X）。圖像：黃色（核YFP）、藍色（Cy?5標記的DNA）、紅色（Cy?3標記的siRNA）、綠色（肌動蛋白細胞骨架）。
圖5. TransIT-X2? Dynamic Delivery System比Lipofectamine?2000具有更高的敲除率
TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）和Lipofectamine?2000轉(zhuǎn)染試劑（Thermo Fisher Scientific）用于轉(zhuǎn)染靶向內(nèi)源性蛋白GAPDH和aha1的siRNA，或在原代正常人真皮成纖維細胞（NHDF）中遞送非靶向?qū)φ铡８鶕?jù)說明書，使用4μl TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）或6μl Lipofectamine?2000（Thermo Fisher Scientific）和25nM siRNA在6孔板中轉(zhuǎn)染細胞。使用qRT-PCR測定GAPDH或aha1mRNA相對于18S rRNA水平的量，然后在轉(zhuǎn)染后48
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