中和抗體檢測(cè)——RSV疫苗評(píng)價(jià)金標(biāo)準(zhǔn)
呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus，RSV）是一種包膜單股負(fù)鏈RNA病毒， RSV可以引起全年齡段人群的呼吸道感染，是世界范圍內(nèi)引起5歲以下兒童急性下呼吸道感染（ALRTI）最常見的病毒病原，是造成嬰幼兒病毒性呼吸道感染住院的首要因素。
目前對(duì)于RSV的防治手段主要是疫苗及抗體藥物，中和抗體檢測(cè)是鑒定疫苗有效性的黃金標(biāo)準(zhǔn)，測(cè)定RSV（呼吸道合胞病毒）中和抗體的方法有多種，主要有熒光斑點(diǎn)計(jì)數(shù)法（Focus-Forming Assay, FFA）、噬斑法（Plaque Assay）、細(xì)胞病變效應(yīng)法（Cytopathic Effect, CPE）、和ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）等。
熒光斑點(diǎn)計(jì)數(shù)法-RSV中和抗體檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果案例（左上角為熒光數(shù)值）
快速準(zhǔn)確的熒光斑點(diǎn)計(jì)數(shù)法
熒光斑點(diǎn)計(jì)數(shù)法（Focus-Forming Assay, FFA）相對(duì)于傳統(tǒng)的細(xì)胞病變效應(yīng)（Cytopathic Effect, CPE）法、噬斑法（Plaque Assay）和其他方法具有以下一些優(yōu)勢(shì)：
1. 靈敏度和特異性高
a. 更高的靈敏度
迪福潤(rùn)絲生物的熒光斑點(diǎn)計(jì)數(shù)法通過DIFF-GFP熒光報(bào)告病毒檢測(cè)或標(biāo)記病毒抗原的熒光抗體檢測(cè)，可以識(shí)別早期感染和低水平的病毒復(fù)制，無需等待病毒大量復(fù)制引起明顯的細(xì)胞病變。
b. 特異性強(qiáng)
熒光斑點(diǎn)計(jì)數(shù)法可以更準(zhǔn)確地識(shí)別RSV病毒感染，不容易受到其他細(xì)胞變化的干擾。
2. 快速結(jié)果
熒光斑點(diǎn)計(jì)數(shù)法通常能夠在較短時(shí)間內(nèi)獲得結(jié)果，因?yàn)樗灰蕾囉谟^察顯著的細(xì)胞病變。相比之下，其他檢測(cè)方法可能需要更長(zhǎng)的時(shí)間來觀察到細(xì)胞病變，迪福潤(rùn)絲生物的RSV中和抗體檢測(cè)24小時(shí)即可觀察熒光反應(yīng)。
3. 定量準(zhǔn)確
熒光斑點(diǎn)計(jì)數(shù)法可以通過計(jì)數(shù)熒光斑點(diǎn)的數(shù)量直接定量病毒感染的程度，不依賴主觀觀察和評(píng)分，定量精度較低從而更精確地測(cè)定中和抗體的效價(jià)。
綜合對(duì)比表格：
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特性 特性 |
熒光斑點(diǎn)計(jì)數(shù)法（FFA） |
噬斑法（Plaque Assay） |
細(xì)胞病變效應(yīng)法（CPE） |
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靈敏度 |
高 |
中 |
低 |
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特異性 |
高 |
中 |
低 |
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速度 |
快 |
慢 |
慢 |
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定量準(zhǔn)確性 |
高 |
中 |
低 |
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自動(dòng)化和高通量 |
易于實(shí)現(xiàn) |
難以實(shí)現(xiàn) |
難以實(shí)現(xiàn) |
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設(shè)備需求 |
高 |
中 |
低 |
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成本 |
中 |
低 |
低 |
熒光斑點(diǎn)計(jì)數(shù)法在檢測(cè)RSV中和抗體時(shí)具有更高的靈敏度和特異性，能夠快速獲得準(zhǔn)確的定量結(jié)果，并且適合自動(dòng)化和高通量分析。這些優(yōu)勢(shì)使其在許多情況下優(yōu)于傳統(tǒng)的CPE法、噬斑法（Plaque Assay）和其他檢測(cè)方法，特別是在需要快速、準(zhǔn)確和高通量檢測(cè)的科研和實(shí)際應(yīng)用中。盡管初期設(shè)備和試劑成本準(zhǔn)備上需要一定投入，但其在快速、準(zhǔn)確和高效檢測(cè)方面的優(yōu)勢(shì)，使其成為檢測(cè)RSV中和抗體的優(yōu)選方法。
一天出結(jié)果！RSV中和抗體檢測(cè)服務(wù)流程
迪福潤(rùn)絲生物自有的的CRO服務(wù)平臺(tái)「DIFF+」可針對(duì)RSV疫苗效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，提供基于熒光斑點(diǎn)計(jì)數(shù)法的RSV中和抗體檢測(cè)服務(wù)，該檢測(cè)方法能夠與傳統(tǒng)的PRNT檢測(cè)方法建立線性相關(guān)性，靈敏度高、檢測(cè)迅速（24h即可出結(jié)果），并且該實(shí)驗(yàn)方法的特異性、重復(fù)性均能滿足中和實(shí)驗(yàn)的要求，適用于高通量樣本的檢測(cè)。
RSV中和抗體檢測(cè)流程圖
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迪福潤(rùn)絲生物建立了完善的生物資源庫(kù)（Bio Database）,可提供豐富的RSV毒株進(jìn)行更加準(zhǔn)確可靠的疫苗評(píng)價(jià)。檢測(cè)用毒株包括RSV A和RSV B兩種亞型共六種毒株（A2、Long、CH-18537、9320、ON1、BA9）。
RSV中和抗體檢測(cè)服務(wù)案例
基于上文所示的檢測(cè)流程，通過DIFF-GFP熒光報(bào)告病毒，迪福潤(rùn)絲生物可進(jìn)行RSV疫苗中和抗體檢測(cè)及抗病毒藥物篩選等服務(wù)，24小時(shí)可快速得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。將待測(cè)樣本與RSV病毒共孵育后加入待感染細(xì)胞，CC孔為細(xì)胞對(duì)照，不加病毒，VC孔為病毒對(duì)照，只加病毒，檢測(cè)結(jié)果如圖所示。
根據(jù)熒光斑點(diǎn)計(jì)數(shù)儀的斑點(diǎn)計(jì)數(shù)結(jié)果，半中和滴度NT50使用GraphPad Prism軟件中的非線性回歸分析計(jì)算值。
毒株資源列表：
服務(wù)內(nèi)容
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RSV真病毒血清中和抗體檢測(cè)服務(wù) |
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樣本類型 |
血清、血漿或抗體樣本 |
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檢測(cè)方法 |
熒光斑點(diǎn)計(jì)數(shù)法 |
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質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) |
提供自研的陽(yáng)性對(duì)照（單抗） |
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成果交付 |
檢測(cè)報(bào)告 |