根據(jù)GB/T 18281.1-2024 《醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌 生物指示物 第1部分：通則》生物指示劑的培養(yǎng)時(shí)間一般為7天。但是在接收成品生物指示劑時(shí)，你可能會(huì)發(fā)現(xiàn)說明書上標(biāo)示的生物指示劑培養(yǎng)時(shí)間是7天、48h、24h，甚至是更短的3h、30min，這些小于要求的培養(yǎng)時(shí)間是怎么確定的呢？
縮短生物指示劑培養(yǎng)時(shí)間需依據(jù)ISO 11138-8：2021《Sterilization of health care products — Biological indicators —Part 8: Method for validation of a reduced incubation time for a biological indicator》開展實(shí)驗(yàn)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確認(rèn)最短的培養(yǎng)時(shí)間。該標(biāo)準(zhǔn)的等同替代國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)為GB/T 18281.8 - 2024《醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌 生物指示物 第8部分：縮短生物指示物培養(yǎng)時(shí)間的確認(rèn)方法》，于2024年11月發(fā)布，將于2026年06月正式實(shí)施。
以泰林SS6-121型自含式壓力蒸汽滅菌生物指示劑的縮短培養(yǎng)時(shí)間測(cè)試結(jié)果為例，我們?cè)敿?xì)介紹如何確認(rèn)生物指示劑的縮短培養(yǎng)時(shí)間。
確認(rèn)生物指示劑在部分周期滅菌的條件，使生物指示劑在此周期中滅菌，培養(yǎng)7天后預(yù)期有30%～95%呈現(xiàn)陽(yáng)性。
將待測(cè)批次生物指示劑在抗力儀中121℃滅菌16min，培養(yǎng)7天后，生物指示劑的陽(yáng)性率為70%，認(rèn)為該滅菌時(shí)間符合預(yù)期要求；假如在相同條件下，生物指示劑培養(yǎng)7天后的陽(yáng)性率低于30%或高于95%，則認(rèn)為該滅菌時(shí)間不符合預(yù)期，需要調(diào)整滅菌時(shí)間，使滅菌后生物指示劑的陽(yáng)性率在30%～95%之間；表1介紹了該款生物指示劑滅菌時(shí)間的篩選過程，三批次生物指示劑在滅菌時(shí)間為16min時(shí)，陽(yáng)性率在40%～65%之間，均符合要求。可以確認(rèn)后續(xù)的滅菌條件為：121℃，16min。
取3批次該產(chǎn)品，每批次100支生物指示劑，按照步驟（01）中確認(rèn)的滅菌時(shí)間進(jìn)行殺滅，即抗力儀中121℃滅菌16min。
殺滅結(jié)束后，按說明書要求進(jìn)行接種操作，并轉(zhuǎn)移至規(guī)定的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)7天。按照預(yù)先確定的時(shí)間間隔，記錄生物指示劑的陽(yáng)性結(jié)果和陰性結(jié)果。例如，設(shè)定的時(shí)間間隔為24h，每隔24h進(jìn)行結(jié)果記錄，最終的培養(yǎng)時(shí)間結(jié)果以“h”為單位。測(cè)試結(jié)果見表2。
在相同的培養(yǎng)時(shí)間間隔下，3批次生物指示物陽(yáng)性的數(shù)量與第7d的陽(yáng)性生物指示物數(shù)量之間的相關(guān)度≥97%，即表2中“生長(zhǎng)比例”≥97%，可以確認(rèn)為最短的培養(yǎng)時(shí)間。計(jì)算公式如下：
可知，第一次批次和第二批次指示劑在培養(yǎng)24h時(shí)，生長(zhǎng)比例均＜97%，無法以“24h”作為最短培養(yǎng)時(shí)間；當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間為48h時(shí)，三批次生物指示劑的生長(zhǎng)比例均為100%，滿足標(biāo)準(zhǔn)中“≥97%”的要求，可以選擇48h作為該生物指示劑的最終培養(yǎng)時(shí)間。因此，泰林SS6-121型自含式壓力蒸汽滅菌生物指示劑的說明書標(biāo)示的培養(yǎng)時(shí)間為48h。
目前，該方法在醫(yī)療器械、醫(yī)院等應(yīng)用廣泛，如快速生物指示劑（培養(yǎng)時(shí)間一般為3h）、極速生物指示劑（培養(yǎng)時(shí)間一般為30min），這些生物指示劑呈陽(yáng)性的確認(rèn)主要通過檢測(cè)生物指示劑的熒光強(qiáng)度。2023版《藥品GMP指南》中明確指出，ISO 11138-8：2021《Sterilization of health care products — Biological indicators —Part 8: Method for validation of a reduced incubation time for a biological indicator》中描述了縮短培養(yǎng)時(shí)間的方法，只適用于特定行業(yè)（如醫(yī)院或者醫(yī)療保健機(jī)構(gòu)）下和某些生物指示劑，并不適用于制藥行業(yè)。
ISO 11138-8規(guī)定的縮短生物指示劑培養(yǎng)時(shí)間的確認(rèn)方法，確認(rèn)滅菌時(shí)間后至少需要3批次生物指示劑，各100支，通過持續(xù)觀察滅菌后生物指示劑陰性、陽(yáng)性的數(shù)量，以確認(rèn)最短的培養(yǎng)時(shí)間。
那么，現(xiàn)在你理解縮短生物指示劑培養(yǎng)時(shí)間是如何確認(rèn)的了嗎？