來(lái)自TriLink的Next-level體外轉(zhuǎn)錄（IVT）試劑盒
體外轉(zhuǎn)錄技術(shù)（In Vitro Transcription，IVT）是指在無(wú)細(xì)胞體系中，以 DNA 為模板，利用 RNA 聚合酶催化合成 RNA 分子的技術(shù)。其核心優(yōu)勢(shì)是無(wú)需依賴活細(xì)胞，可快速、定向生產(chǎn)高純度、高特異性的 RNA（如 mRNA、siRNA、shRNA、rRNA 等），且能通過(guò)修飾優(yōu)化 RNA 的穩(wěn)定性、翻譯效率或免疫原性，已成為分子生物學(xué)、基因治療、疫苗研發(fā)等領(lǐng)域的核心工具。
CleanCap® IVT試劑盒：簡(jiǎn)而不凡
TriLink的CleanCap® IVT試劑盒通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄及 CleanCap® 共轉(zhuǎn)錄加帽合成 mRNA 所需的全部核心組分。極大的優(yōu)化了RNA合成與加帽流程，同時(shí)顯著提升實(shí)驗(yàn)結(jié)果，是高性能RNA合成的一體化解決方案。
CleanCap® 目前有兩款高效的mRNA合成Kit，無(wú)論您是IVT領(lǐng)域的新手，還是想要將蛋白表達(dá)效率最大化，這兩款試劑盒都可以助您一步獲得高產(chǎn)量、低dsRNA的加帽mRNA：
CleanCap® AG (3' OMe) CleanScript™ IVT Kit ：
通用性強(qiáng)，無(wú)需過(guò)多優(yōu)化；采用CleanCap® AG (3' OMe) 帽類似物，是原始CleanCap® AG的改良版本，可實(shí)現(xiàn)更高的蛋白表達(dá)水平。
CleanCap® M6 High Yield IVT Kit：
包含TriLink最新的帽類似物CleanCap® M6，相較于酶法加帽和CleanCap® AG類似物，可以實(shí)現(xiàn)更高的蛋白表達(dá)；為了實(shí)現(xiàn)最佳產(chǎn)率，需要對(duì)5' UTR序列進(jìn)行評(píng)估。
圖一：mRNA的帽結(jié)構(gòu)會(huì)影響蛋白表達(dá)水平。采用 CleanCap M6 帽類似物的mRNA，其蛋白表達(dá)水平高于其前代產(chǎn)品（A）及酶法加帽技術(shù)(B)。
圖二：TriLink的新型RNA聚合酶可以顯著降低mRNA合成過(guò)程中dsRNA的形成。在使用 CleanCap AG（3′OMe）和 CleanCap M6 帽類似物合成未修飾或 N1 - 甲基假尿苷（N1 MePsU）修飾的 mRNA 時(shí)，CleanScribe™ RNA 聚合酶可顯著減少dsRNA的形成。
圖三：優(yōu)化的IVT方案可顯著提高 CleanCap AG（3’OMe） mRNA的產(chǎn)率。 采用TriLink的CleanScript IVT方案，CleanCap AG（3’OMe）mRNA濃度最高可達(dá)10 mg/mL，較傳統(tǒng)方案提升高達(dá)兩倍。
圖四：脈沖進(jìn)料可以進(jìn)一步提高CleanCap M6 mRNA的產(chǎn)率。 經(jīng)2h脈沖進(jìn)料（操作方法參考protocol）后，CleanCap M6 mRNA 的產(chǎn)率最高可達(dá)10mg/ml，相較于傳統(tǒng)流程提升近2倍。
兩款Kit如何選擇呢？
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CleanCap® AG (3' OMe) CleanScript™ IVT Kit |
CleanCap® M6 IVT Kit, High Yield |
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操作經(jīng)驗(yàn) |
通用序列兼容性強(qiáng)，適合該開始進(jìn)行mRNA研究的用戶 |
優(yōu)化蛋白表達(dá)，適合希望最大限度提高mRNA表達(dá)和整體效力的客戶 |
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帽類似物 |
CleanCap® AG (3' OMe) |
CleanCap® M6 |
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蛋白表達(dá)水平 |
+++ |
++++ |
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可合成的RNA類型 |
mRNA |
mRNA |
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序列兼容性 |
通用性強(qiáng)-適用所有UTR |
5' UTR序列可能影響產(chǎn)率 |
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轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn) |
AG起始 |
AG起始 |
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包含的修飾rNTP |
N1 - 甲基假尿苷 |
N1 - 甲基假尿苷 |
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包含的10×緩沖液 |
CleanScript™ 體外轉(zhuǎn)錄緩沖液 |
M6體外轉(zhuǎn)錄緩沖液 |
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包含的酶混合物 |
AG CleanScribe™ RNA 聚合酶混合物 |
M6 CleanScribe™ RNA 聚合酶混合物 |
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每100 µL反應(yīng)預(yù)期產(chǎn)率 |
0.8-1mg |
0.8-1mg |
下方表格對(duì)兩款試劑盒的特性進(jìn)行了對(duì)比，兩款產(chǎn)品根據(jù)對(duì)蛋白表達(dá)水平、下游應(yīng)用及IVT操作經(jīng)驗(yàn)的不同需求，提供了各自獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。您可以根據(jù)具體需求，選擇最適合您的試劑盒。
訂購(gòu)信息：
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產(chǎn)品名稱 |
貨號(hào) |
反應(yīng)規(guī)格 |
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CleanCap® AG (3' OMe) CleanScript™ IVT Kit |
K-7413-25 |
25 x 100 μL 或 125 x 20 μL |
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CleanCap® M6 IVT Kit, High Yield |
K-7453-25 |
CleanCap® AG (3' OMe) CleanScript™ IVT Kit中組分：
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Component |
Concentration |
Amount |
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CleanCap® Reagent AG (3′ OMe) |
100 mM |
10 µmol |
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Adenosine-5′-Triphosphate |
100 mM |
100 µmol |
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Cytidine-5′-Triphosphate |
100 mM |
100 µmol |
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Guanosine-5′-Triphosphate |
100 mM |
100 µmol |
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Uridine-5′-Triphosphate |
100 mM |
100 µmol |
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N1-Methyl-Pseudouridine-5′-Triphosphate |
100 mM |
100 µmol |
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AG CleanScribe™ RNA Polymerase Mix |
10X |
250 µL |
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10X AG CleanScript™ IVT Buffer |
10X |
1 mL |
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FLuc Control Plasmid |
0.5 µg/µL |
25 µg |
CleanCap® M6 IVT Kit中組分：
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Component |
Concentration |
Amount |
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CleanCap® Reagent M6 |
100 mM |
25 µmol |
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Adenosine-5′-Triphosphate |
100 mM |
100 µmol |
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Cytidine-5′-Triphosphate |
100 mM |
100 µmol |
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Guanosine-5′-Triphosphate |
100 mM |
100 µmol |
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Uridine-5′-Triphosphate |
100 mM |
100 µmol |
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N1-Methyl-Pseudouridine-5′-Triphosphate |
100 mM |
100 µmol |
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M6 CleanScribe™ RNA Polymerase Mix |
10X |
250 µL |
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10X M6 IVT Buffer |
10X |
1 mL |
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FLuc Control Plasmid （linearized） |
0.5 µg/µL |
25 µg |
相關(guān)產(chǎn)品
可用作對(duì)照的目錄mRNA
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產(chǎn)品名稱 |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
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CleanCap® M6 EGFP mRNA (N1MePsU) |
L-8101 |
0.1mg、1mg、5mg或定制 |
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CleanCap® M6 FLuc mRNA (N1MePsU) |
L-8102 |
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CleanCap® M6 mCherry mRNA (N1MePsU) |
L-8103 |
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CleanCap® M6 Cas9 mRNA (N1MePsU) |
L-8106 |
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CleanCap® M6 EPO mRNA (N1MePsU) |
L-8109 |
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CleanCap® M6 Cre mRNA (N1MePsU) |
L-8111 |
常見問(wèn)題
Q：我該如何選擇這兩款試劑盒？
A：試劑盒的選擇取決于您期望的蛋白表達(dá)水平、下游應(yīng)用場(chǎng)景，以及您的 IVT（體外轉(zhuǎn)錄）實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)。
CleanCap® AG (3' OMe) CleanScript™ IVT kit：這是一款通用性強(qiáng)的試劑盒，僅需少量?jī)?yōu)化即可合成高產(chǎn)量、低雙鏈 RNA（dsRNA）的加帽 mRNA。經(jīng)證實(shí)，CleanCap® AG (3' OMe) 帽類似物比初代 CleanCap® AG 帽類似物的蛋白表達(dá)水平更高，且已應(yīng)用于商業(yè)化獲批的 mRNA 疫苗中。
CleanCap® M6 IVT kit（High yeild）：該試劑盒包含最新的 CleanCap® M6 帽類似物，適合追求比酶法加帽及前代 CleanCap® AG 類似物更高蛋白表達(dá)的用戶。若要通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方案達(dá)到最高 5 mg/mL 的產(chǎn)量，或通過(guò)補(bǔ)充脈沖進(jìn)料方案達(dá)到 10 mg/mL 的產(chǎn)量，用戶可能需要評(píng)估自身 5'-UTR序列的兼容性。
Q：可以用這兩個(gè)試劑盒來(lái)制備不加帽的mRNA嗎？
A：對(duì)于CleanCap® AG（3' OMe）和CleanCap® M6 IVT試劑盒，你可以在我們提供的protocol中省略加帽步驟，從而獲得無(wú)帽mRNA，預(yù)期產(chǎn)量相近。不過(guò)，如果你的模板是“AG起始”，5'端的異質(zhì)性會(huì)更高（例如A和G的混合物）。根據(jù)無(wú)帽mRNA的應(yīng)用需求，若有需要，可通過(guò)磷酸酶處理去除5'三磷酸基團(tuán)。
Q：使用 CleanCap® M6 帽類似物合成的 mRNA，其翻譯效率與 CleanCap® AG (3' OMe) 帽類似物及酶法加帽相比如何？
A：通過(guò)體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，我們持續(xù)觀察到：與 CleanCap AG (3' OMe) 帽類似物及酶法加帽的 mRNA 相比，用 CleanCap M6 加帽的 mRNA 蛋白表達(dá)水平更高（提升幅度≥30%）。
這種蛋白表達(dá)的提升，部分原因可能是 CleanCap M6 類似物上的 N6 - 甲基化腺苷抑制了 Dcp2 介導(dǎo)的脫帽作用。（DOI: 10.1016/j.omtn.2025.102456 External Link）
Q：5'UTR序列會(huì)對(duì)CleanCap® M6 IVT 試劑盒產(chǎn)生什么影響？
A：我們觀察到，CleanCap M6 IVT 試劑盒的產(chǎn)量可能會(huì)受到部分 5'UTR 序列的影響。如果您對(duì)自己使用的UTR序列有顧慮，請(qǐng)聯(lián)系我們獲取技術(shù)支持。
Q：如何優(yōu)化 mRNA 的 5'UTR 和 3'UTR 序列？
A：mRNA 的5'UTR和3'UTR的優(yōu)化取決于您的具體研究目的，以及 mRNA 對(duì)應(yīng)的靶細(xì)胞或組織類型。
為支持這一需求，TriLink的Officinae Bio 服務(wù)提供專業(yè)的優(yōu)化服務(wù)：您只需提供您的序列和 UTR 信息，TriLink會(huì)進(jìn)行密碼子優(yōu)化，以幫助實(shí)現(xiàn)最佳表達(dá)效果。
此外，查閱已發(fā)表的文獻(xiàn)是確定與您的應(yīng)用場(chǎng)景相關(guān)的UTR序列的有效方式。我們也建議開展篩選實(shí)驗(yàn)，以評(píng)估翻譯效率。
如果您使用的是 TriLink的mRNA 服務(wù)，我們?cè)?DNA 模板中集成了自主 UTR 序列選項(xiàng)，您可以將開放閱讀框（ORF）插入其中，從而簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)流程。
詳情請(qǐng)咨詢 TriLink中國(guó)獨(dú)家代理商——欣博盛生物
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