熱的受不了的高溫假來啦，你的細(xì)胞會選擇什么樣的方式入眠靜等高溫假后復(fù)蘇呢？
細(xì)胞凍存是一項(xiàng)重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，凍存的不好，三天復(fù)蘇死光光，凍存得當(dāng)在液氮里放個(gè)5-10年都沒有問題，那么細(xì)胞凍存需要注意什么呢？
1. 細(xì)胞狀態(tài)：
- 確保細(xì)胞狀態(tài)良好，生長平穩(wěn)，成對數(shù)生長，無污染、形態(tài)良好沒有變異。
- 選擇匯合度80%-90%左右。處于生長平頂期的細(xì)胞進(jìn)行凍存操作，以確保細(xì)胞在凍存時(shí)狀態(tài)最佳。
- 若細(xì)胞進(jìn)行支原體查殺或者慢病毒感染 ，細(xì)胞應(yīng)傳兩代直到生長對數(shù)穩(wěn)定后再進(jìn)行凍存。
免程序凍存液-低血清（啟達(dá)生物，貨號：SD0001)
2. 凍存液的選擇：
這個(gè)過程很重要，細(xì)胞在休眠的時(shí)候也會需要少量養(yǎng)分和抗氧化物質(zhì)，因此正常的凍存液配制，我們都會選擇90%FBS+10%DMSO來凍存細(xì)胞，凍存液最好不要現(xiàn)配現(xiàn)用，提前一天配制放4°過夜，據(jù)說可以給DMSO去熱源，細(xì)胞凍存后我們選擇程序降溫即可（方法見下文細(xì)胞的程序降溫）.
啟達(dá)生物的低血清凍存液（啟達(dá)生物，貨號：SD0001)更加讓細(xì)胞凍存更加方便：
它無需程序降溫，細(xì)胞凍存后直接放入-80°過夜，24小時(shí)移入液氮即可，
它含有2%的血清，含有抗氧化劑和細(xì)胞休眠時(shí)所細(xì)胞的蛋白質(zhì)和氨基酸，
它只含有5%DMSO,因?yàn)镈MSO一旦濃度過高會導(dǎo)致細(xì)胞在凍存時(shí)中毒，復(fù)蘇細(xì)胞存活少，或者長時(shí)間不長。
啟達(dá)生物無血清無蛋白凍存液（啟達(dá)生物，貨號：SD0002）適用于限制血清干擾的細(xì)胞凍存:
它采用氨基酸和維生素替代了血清和蛋白組分，研究發(fā)現(xiàn)，IPS或者其他多能干細(xì)胞，血液細(xì)胞等在含有FBS的環(huán)境下長期凍存，復(fù)蘇后會出現(xiàn)分化現(xiàn)象，因此在這類細(xì)胞的凍存中，我們都建議使用無血清無蛋白組分的凍存液，以維持細(xì)胞在休眠時(shí)的營養(yǎng)所需.
它也無需程序降溫，凍存后直接放-80°過夜 ，在-80°冰箱細(xì)胞可保存1-2個(gè)月。
A-375凍存6個(gè)月后復(fù)蘇24小時(shí)形態(tài)：
其他品牌凍存液
啟達(dá)生物免程序無血清凍存液（SD0002）
3. 細(xì)胞凍存過程：
- 凍存管的管蓋并不是擰得越緊越好，因?yàn)楣苌w內(nèi)有O型橡膠圈，擰得太緊會讓其變形，造成泄漏。當(dāng)然，太松也會泄漏。
- 凍存前注意切勿消化時(shí)間過長、吹打力度過重、離心轉(zhuǎn)速過大或離心時(shí)間過長，以免造成細(xì)胞損傷。
- 凍存細(xì)胞不宜密度過大，一般腫瘤細(xì)胞株的凍存在1*10^6cell/ml， 巨噬細(xì)胞需要1.5-2x10^6cell/ml。神經(jīng)細(xì)胞凍存時(shí)因?yàn)榧?xì)胞個(gè)頭比較大，通常不好估計(jì)數(shù)量，而神經(jīng)細(xì)胞復(fù)蘇的死亡也很高 ，建議凍存數(shù)量在1*10^6cell/ml以上。
免程序凍存液無血清無蛋白（啟達(dá)生物，貨號：SD0002）
4. 細(xì)胞程序降溫：
- 采用“慢凍快融”的方法，標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min，當(dāng)溫度低于-25℃時(shí)可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。
- 如果沒有程序降溫盒，則按下列順序依次降溫：室溫→4℃ 20min→-20℃ 30min→-80℃過夜→液氮保存。
若使用的是免程序降溫凍存液，可省略這一步鄹。
5. 長期保存：
- 細(xì)胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；細(xì)胞儲存在液氮中，溫度達(dá)-196℃，理論上儲存時(shí)間是無限的。
- 凍存細(xì)胞長期保存應(yīng)放置于液氮，不建議在-80℃長期保存，-80°長期保存會讓您的細(xì)胞復(fù)蘇存活和狀態(tài)都大打折扣。
細(xì)胞凍存完成，趁高溫假好好給自己放個(gè)假吧