與mRNA兩端暴露不同，circRNA分子呈共價(jià)閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)，不易被RNase降解，具有較高的穩(wěn)定性，因而大大延長(zhǎng)了其半衰期，從而達(dá)到長(zhǎng)時(shí)效的目的。同時(shí)也是因?yàn)槠浣Y(jié)構(gòu)的特殊性，較難被機(jī)體的抗原識(shí)別受體識(shí)別，因此不需要修飾核苷酸的引入降低免疫原性，從而降低了合成成本。
circRNA體外合成常見方法包括：I型內(nèi)含子自剪接、Ⅱ型內(nèi)含子自剪接及T4 RNA連接酶介導(dǎo)的酶法連接。近岸蛋白推出的Circular RNA Synthesis Kit (PIE I)（Cat.No.:E336），基于I型內(nèi)含子自剪接機(jī)制，實(shí)現(xiàn)高效、便捷的circRNA制備。
試劑盒配備體外轉(zhuǎn)錄全套試劑、環(huán)化專用Buffer和LiCl純化試劑，操作流程簡(jiǎn)單。通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄獲得RNA前體，經(jīng)環(huán)化反應(yīng)，環(huán)化效率可達(dá)70%以上。
合成后的circRNA可通過(guò)RNase R(Cat. No.:E224)處理純化后，獲得更高純度的目標(biāo)產(chǎn)物，適用于后續(xù)功能研究或體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)。
數(shù)據(jù)展示
1 circRNA合成
圖例）使用Circular RNA Synthesis Kit (PIE I)進(jìn)行eGFP circRNA（泳道1-3）和Luciferase circRNA（泳道4-6）合成，經(jīng)過(guò)環(huán)化反應(yīng)后大部分Pre RNA環(huán)化成circRNA。RNase R去除線性RNA后，circRNA純度進(jìn)一步提升。
2 circRNA表達(dá)
eGFP mRNA和circRNA在293T細(xì)胞中表達(dá)
與eGFP mRNA相比，circRNA維持高水平表達(dá)。
與Luciferase mRNA相比，circRNA維持高水平表達(dá)。
兩款circRNA藥物相繼獲批臨床，無(wú)疑給眾多circRNA研究人員打上了一劑強(qiáng)心針。隨著序列設(shè)計(jì)的不斷優(yōu)化，環(huán)化工藝的進(jìn)一步探索，伴隨circRNA的各項(xiàng)技術(shù)壁壘也將會(huì)逐步打破，越來(lái)越多的研發(fā)管線滿足臨床治療需求，circRNA未來(lái)可期。
科研級(jí)RNA合成相關(guān)產(chǎn)品
| 應(yīng)用場(chǎng)景 | 目錄號(hào) | 名稱 |
| 質(zhì)粒線性化 | RE057 | BspQI |
| RE015 | XbaI | |
| RE106 | PmeI | |
| RE107 | NotI | |
| RE108 | HindIII | |
| mRNA合成 | E332 | T7 High Yield RNA Transcription Kit 2.0 |
| E334 | T7 High Yield RNA Transcription Kit 2.0 (N1-Me-pUTP) | |
| E131 | T7 High Yield RNA Transcription Kit | |
| M082 | Cap 1 Capping System | |
| M012 | E.Coli Poly A Polymerase | |
| E331 | T7 High Yield RNA Co-Transcription Kit for Low dsRNA with CAP1 GAG | |
| E431 | T7 High Yield RNA Co-Transcription Kit for Low dsRNA with CAP1 GAG (3‘OMe) | |
| saRNA合成 | E231 | T7 High Yield RNA Transcription Kit for Long Fragment with CAP1 GAG |
| E233 | T7 High Yield RNA Transcription Kit for Long Fragment with CAP1 GAU | |
| E341 | T7 High Yield RNA Transcription Kit for Long Fragment | |
| circRNA合成 | E336 | Circular RNA Synthesis Kit (PIE Ⅰ) |
| circRNA純化 | E224 | RNase R |
| mRNA | MR008/MR010 | eGFP mRNA/eGFP mRNA (N1-Me-Pseudo UTP) |
| MR009/MR011 | Luciferase mRNA/Firefly Luciferase mRNA (N1-Me-Pseudo UTP) | |
| MR105 | mCherry mRNA (N1-Me-Pseudo UTP) | |
| MR204 | tdTomato mRNA (N1-Me-Pseudo UTP) | |
| MR203 | Cre mRNA (N1-Me-Pseudo UTP) | |
| MR015 | OVA mRNA (N1-Me-Pseudo UTP) | |
| MR016 | hEPO mRNA (N1-Me-Pseudo UTP) | |
| MR019/MR107 | Cas9 mRNA (N1-Me-Pseudo UTP)/Cas9 Mrna | |
| MR205 | Cas12bMax Enhanced mRNA (N1-Me-Pseudo UTP) | |
| MR208 | enCas12Ultra mRNA (N1-Me-Pseudo UTP) | |
| circRNA | MR201 | eGFP circRNA |
| MR202 | Luciferase circRNA | |
| saRNA | MR301 | eGFP saRNA |
| MR302 | Firefly Luciferase saRNA | |
| MR401 | eGFP saRNA (5-Methyl-CTP) | |
| MR402 | Firefly Luciferase saRNA (5-Methyl-CTP) |