2017年5月29日，第二軍醫(yī)大學(xué)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)教研室孫樹漢教授團隊在《Nature Cell Biology》上發(fā)表了《The MBNL3 splicing factor promotes hepatocellular carcinoma by increasing PXN expression through the alternative splicing of lncRNA-PXN-AS1》，文章揭示了剪接因子MBNL3可以通過lncRNA-PXN-AS1的可變性剪接，增加PXN的表達量，從而促進癌癥發(fā)生，導(dǎo)致肝細(xì)胞癌HCC患者預(yù)后不良。這項研究將剪接因子，剪接事件與腫瘤發(fā)生聯(lián)系在了一起，表明了剪接因子和剪接事件可以作為潛在的治療靶點。
肝細(xì)胞癌（Hepatocellular carcinoma, HCC），是目前我國致死率居第二位的惡性腫瘤，侵襲力強，易轉(zhuǎn)移，預(yù)后差，五年預(yù)后存活率僅有10~20%。因此，確定此過程中的分子調(diào)控機制會更有效的促進靶點治療的發(fā)展。
MBNL3是一種癌胚基因，高表達量的MBNL3與高濃度的血清胎蛋白（AFP）、較大的腫瘤以及低預(yù)后率相關(guān)。在HCC組織中，MBNL3 的表達量較高。
lncRNA-PXN-AS1的反義鏈PXN有兩個轉(zhuǎn)錄本，PXN-AS1-L (包含4號外顯子) 和PXN-AS1-S（不包含4號外顯子），二者都可以與PXN的mRNA相互作用。PXN-AS1-L可以促進PXN表達，PXN-AS1-S抑制 PXN的表達。過表達MBNL3 可以誘導(dǎo)lncRNA-PXN-AS1 4號外顯子增加，PXN-AS1-L的表達量增加，從而引起PXN蛋白量增加。
RNA免疫沉淀實驗證明PXN-AS1-L和PXN-AS1-S競爭PXN的mRNA結(jié)合位點。氨甲基交聯(lián)技術(shù)和鄰位連接技術(shù)（PLA）以及進一步的測序分析也揭示了PXN-AS1-L的4號外顯子可以與PXN的mRNA 3’UTR結(jié)合，從而使PXN mRNA擺脫被降解的“厄運”，蛋白表達量增加。PXN通過提高凋亡抑制因子MCL1的表達量，降低凋亡活化因子BIM的表達量從而抑制細(xì)胞的凋亡，促進腫瘤的生長。
在鄰位連接技術(shù)中，RNA解交聯(lián)后經(jīng)過乙醇沉淀、溶解等步驟，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，通過PCR擴增后測序，揭示PXN-AS1-L與PXN mRNA結(jié)合的分子機制。其中，PCR擴增中使用的DNA聚合酶是由近岸蛋白提供的Hot Start Taq DNA Polymerase（目錄號E017），采用化學(xué)修飾的方法封閉酶的活性中心，極大的提高了擴增的特異性和靈敏度，并且具有較高的穩(wěn)定性，適用于高特異性PCR 反應(yīng)、高GC含量(>60%)、有二級結(jié)構(gòu)等有較強背景的基因組擴增和大規(guī)模基因組擴增檢測。
孫教授團隊揭示了MBNL3和lncRNA-PXN-AS14號外顯子增加在肝癌的發(fā)生中扮演了重要的角色，可以作為預(yù)后的生物標(biāo)記物用于HCC的靶位點治療，也揭示了lncRNA的可變剪接可以顯著性改變它的生物學(xué)功能，并且為癌癥中的lncRNA和剪接研究提供了一個新的視角。